蔬菜中硝酸盐含量试剂盒,微板法

蔬菜中硝酸盐含量试剂盒,微板法

蔬菜中硝酸盐含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 蔬菜中硝酸盐含量测定试剂盒说明书 （货号：WS0440W 微板法 96 样） 一、产品简介： 用 pH9.6～9.7 碱性缓冲液提取样品中硝酸根离子，同时加活性炭去除色素类，加沉 淀剂去除蛋白质及其他干扰物质，利用硝酸根离子和亚硝酸根离子在紫外区 219nm 处 具有等吸收波长的特性，测定提取液的吸光度，其测得结果为硝酸盐和亚硝酸盐吸光度 的总体，鉴于新鲜蔬菜、水果中亚硝酸盐含量甚微，可忽略不计。测定结果为硝酸盐的 吸光度，依据从标准曲线计算出硝酸盐含量。 二、试剂盒的组成和配制： 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 活性炭 1g×1 支 室温 试剂一 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 2mL×1 支 4℃保存 试剂三 液体 2mL×1 支 4℃保存 标准品 液体×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔 UV 板（用于紫外光波长下的测定）、蒸馏水、常温离心机，可调式往返 振荡机。 四、蔬菜中硝酸盐含量测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解样本自身情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本处理： ① 组织样本：取 0.2g 组织样本（若样本较大可研磨粉碎后取样），加 1mL 的蒸馏水 研磨匀浆，全部转移至 2mLEP 管中，再依次加入 0.06mL 试剂一和 10mg 的活性炭 混匀，放置于可调式往返振荡机上（200 次/min）振荡 30min(如无此仪器需间隔 3min 手动晃动几秒)。再依次加入 0.02mL 的试剂二和 0.02mL 的试剂三，充分混匀，加 0.9mL 蒸馏水定容至 2mL，混匀后室温放置 5min。12000rpm 室温离心 5min，澄清 的上清液做为样本待检上清液；空白待检上清液制备过程除了不加样本之外，其他 操作步骤同组织样本制备过程。 2、上机检测： 1 酶标仪预热 30min 以上。 2 在 96 孔 UV 板中依次加入： 试剂名称（μL) 测定管 空白管（仅做一次） 样本待检测上清液 200 空白待检测上清液 200 混匀， 于 219nm 分别读吸光值 A，△A=A 测定管-A 空白管。 【注】 若 A 值超过 1.2，可用蒸馏水对待检上清液稀释，稀释倍数 D 代入计算公式重新计算； 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 0.0348x + 0.0029；x 为标准品浓度（μg/mL），y 为吸光值△A。本试剂盒仅供科研使用 2 2、蔬菜中硝酸盐（NO3 -）含量(μg/g 或 mg/Kg)=(△A-0.0029)÷ 0.0348×V×D÷W =28.74×(△A-0.0029)×V×D÷W V---最终待测总体积，2mL； W---取样质量，g； D---稀释倍数，未稀释即为 1。 本标准适用于新鲜蔬菜及水果中硝酸盐含量的测定。本方法检出限为 1.2mg/kg。 附：标准曲线制作过程： 1 标准品母液（500μg/mL）： 2 用蒸馏水把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 4, 8, 12,16, 20. μg/mL。也可根据 实际样本来调整标准品浓度。 3 直接取 200μL 不同浓度的标准品至 96 孔 UV 板中，于 219nm 分别读吸光值 A，根 据结果即可制作标准曲线。