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植物铵态氮试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-07

简要描述:

植物铵态氮试剂盒,微板法
氮素是构成生物体的一种必需元素,自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮 气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮

植物铵态氮试剂盒,微板法

植物铵态氮试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 植物铵态氮含量试剂盒说明书 (货号:WS0140W 微板法 96 样) 一、产品简介: 氮素是构成生物体的一种必需元素,自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮 气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮,经过硝化微生物的作用转化成硝态 氮,后者被植物或微生物同化成有机氮化物,植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。 α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热,经氧化脱氨变成相应的α-酮酸,酮酸进一步脱羧变 成醛,水合茚三酮则被还原,在弱酸环境中,还原型茚三酮,氨和另一分子水合茚三酮反应, 缩合生成蓝紫色物质,在 570nm 处有特征吸收峰。 二、测试盒组成和配制: []:粉剂量在 mg 级别,使用前用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。 四、植物铵态氮含量的测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行室温匀浆,12000rpm4℃离心 10min,上 清液置冰上待测。 []:也可按照组织质量(g)提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液; 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,300W,超声 3s,间隔 7s,总时间 3min);12000rpm4℃ 离心 10min,取上清,置冰上待测。 []:若增加样本量,按照细菌/细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 570 nm② 在 EP 管中按照下表依次加入试剂: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 110mL×1 4℃保存 试剂一 液体 60mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂×4 4℃保存 临用前加入 1.5mL 无水乙醇,盖紧后充分 混匀,再加入 13.5mL 试剂一混匀,10 天内 用完。 试剂三 粉剂×3 4℃保存 用前甩几下或 4℃离心使试剂落入试管底 部,每支再加 1.5 mL 蒸馏水充分溶解,用 不完的试剂分装后-20℃保存(可保存一个 ),禁止反复冻融,解冻后可 4℃保存并 一周内使用完。 标准品 液体×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称(μL测定管 空白管(只做一次) 蒸馏水 40 上清液 40 试剂二 560 560 试剂三 40 40 混匀,盖紧盖(可用封口膜缠绕,防止水分散失), 置于沸水浴中 15 min,再冷水迅速冷却, 95%乙醇 320 320 混匀,取 200μL 澄清液体(若浑浊可 8000rpm 室温离心 5min)于 96 孔板中,在 570nm 读取吸光值 AA=A 测定- A 空白。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.3963x + 0.006x 是标准品摩尔浓度(μmol/mL)y ΔA2、按样本质量计算: 铵态氮含量(μmol/g 鲜重)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1] ÷(V1÷V×W) =2.52×(ΔA-0.006)÷W 3、按细胞数量计算: 铵态氮含量(μmol/104 cell)=[(ΔA-0.006) ÷0.3963×V1] ÷(V1÷V×500) =2.52×(ΔA-0.006)÷500 4、按照液体体积计算: 铵态氮含量(μmol/mL)=[(ΔA-0.006) ÷0.3963×V1]÷V1=2.52×(ΔA-0.006) V---样品提取液总体积,1mLV1---加入样本体积,0.04 mL500---细胞数量,百万; W---样品质量,g附:标准曲线制作过程: 1 标准品母液(10μmol/mL); 2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.μmol/mL。也可 根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

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