土壤荧光素二乙酸酯FDA水解酶试剂盒微板法

土壤荧光素二乙酸酯FDA水解酶试剂盒微板法

土壤荧光素二乙酸酯FDA水解酶试剂盒微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤荧光素二乙酸酯（Fluorescein diacetate，FDA）水解酶试剂盒说明书 （货号：WS2230W 微板法 96 样） 一、产品简介： 土壤荧光素二乙酸酯(FDA)水解酶与土壤总碳、全氮、全磷等土壤养分指标间关系密切，与微生物活 性间的相关性比其他酶活性更显着，同时也能够很好地反映系统中有机质的转化和土壤中微生物的活 性，是土壤健康质量的微生物学指标之一。 FDA 是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并经脱水反应，产生酶解终产物—荧 光素，该黄色产物在 490nm 处有强吸收峰，通过检测 490nm 处的吸光值变化即可得出 FDA 水解酶活性。 二、试剂盒组分与配制 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 110mL×2 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 瓶 4℃保存 临用前加 6mL 丙酮充分溶解备用 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、恒温水浴锅、丙酮。 四、FDA 水解酶(FDA)活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本处理： 取新鲜土样风干或 37℃烘箱风干，先粗研磨过 40 目筛备用。 【注】土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 490nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.05 0.05 试剂一 1000 1000 试剂二 50 丙酮 50 混匀，37℃反应 1h 丙酮 150 150 混匀，12000 rpm 离心 10min，取 200μL 至 96 孔板中， 于 490nm 下读取吸光值 A，ΔA＝A 测定-A 对照。 【注】：若ΔA 的差值较大，超过 1.5，可以降低土壤取样量，或者反应产物用蒸馏水稀释之 后再检测，则稀释倍数 D 代入计算公式。 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 0.0878x + 0.0094：x 为标准品质量(μg)，y 为ΔA。本试剂盒仅供科研使用 2、活性定义：每小时每克土样中产生 1μg 荧光素定义为一个酶活力单位。 FDA 活性(μg/h/g)=(ΔA -0.0094)÷0.0878÷W÷T×D=11.39×(ΔA -0.0094)÷W×D T---反应时间，1h； W---土壤样本实际取样量； D---稀释倍数，未稀释即为 1； 荧光素分子量---332.31。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（5μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1 mL 丙酮溶解，再加 1 mL 水（母液需在两天内用且-20℃保存）。 2 把母液用试剂一稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.4,0.8 , 1.2, 1.6, 2. μmol/mL。也 可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 按照 20μL 标准品+1mL 试剂一+180μL 丙酮的体系来操作，依据结果即可制作标准 曲线。 2