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土壤N-乙酰-βD氨基葡萄糖苷酶试剂盒微板法

更新时间:2024-06-07

简要描述:

土壤N-乙酰-βD氨基葡萄糖苷酶试剂盒微板法
土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG,EC 3.2.1.52)是溶酶体中的一种酸性水解 酶,由土壤微生物分泌,该酶的活性变化与机体某些病理状态密切相关。

土壤N-乙酰-βD氨基葡萄糖苷酶试剂盒微板法

土壤N-乙酰-βD氨基葡萄糖苷酶试剂盒微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(S-NAG)试剂盒说明书 (货号:WS1230W 微板法 96 样) 一、产品简介: 土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGEC 3.2.1.52)是溶酶体中的一种酸性水解 酶,由土壤微生物分泌,该酶的活性变化与机体某些病理状态密切相关。 土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(S-NAG)分解 4-硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖生成 -硝基*酚(PNP),在 405nm 处检测该产物的升高速率,来计算 S-NAG 活力大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂 mg×2 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,每瓶 再加 7.6mL 蒸馏水,充分溶解备用, 用不完的试剂仍-20℃保存; 试剂二 液体 80mL×1 4℃保存 试剂三 液体 80mL×1 4℃保存 标准品 粉剂×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅或恒温培养箱、可调式移液器、天平。 四、土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(S-NAG)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本的制备: 取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 空白管(仅做一次) 土样(g0.05 0.05 试剂一 150 150 蒸馏水 150 试剂二 300 300 300 混匀, 37℃(水浴锅或恒温培养箱)振荡反应 1h 试剂三 350 350 350 混匀,12000rpm,离心 10min,取上清液 200μL 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值 AA=A 测定-A 对照-A 空白(每个测定管 需设一个对照管)。 【注】:1.ΔA 在零附近徘徊,可延长 37℃的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加 土样质量 W(如增至 0.2g)。则改变后的 T W 需代入计算公式重新计算。 2.若测定管 A 值大于 1.5 A 大于 1.5,可缩短 37℃的孵育时间 T(如减至 0.5 小时或更短)。 则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对最后一步的待检测上清液(包括测定管、对照管本试剂盒仅供科研使用 2 和空白管)同时用蒸馏水进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.0959x - 0.0056x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA 2、单位定义:每小时每克土样中产生 1nmol -硝基*酚(PNP)定义为一个酶活单位。 S-NAG 活力(nmol/h/g 土样)=(ΔA+0.0056)÷0.0959÷Mr×103÷W÷T×D =75×(ΔA+0.0056) ÷W×D T---反应时间,1hW---实际称取土样质量,gMr--- PNP 相对分子质量,139.11D---稀释倍数,未稀释即为 1附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 EP 管中依次加入:20μL 标准品+130μL 蒸馏水+300μL 试剂二+350μL 试剂三,混 匀,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。

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