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土壤淀粉mei试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-06

简要描述:

土壤淀粉mei试剂盒,微板法
土壤中的淀*酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂。淀*酶可水解淀粉产生还原 糖

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本试剂盒仅供科研使用 1 土壤淀*酶(Soil AmylaseS-AL)试剂盒说明书 (货号:WS8130W 微板法 48 样) 一、产品简介: 土壤中的淀*酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂。淀*酶可水解淀粉产生还原 糖,本试剂盒采用 3,5-二硝基水杨酸与终产物还原糖反应生成棕红色物质,在 540nm 处有 特征吸收峰,进而得到土壤淀*酶活性。 二、测试盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉体 mg×1 4℃保存 临用前加入 60ml 试剂二,80℃水浴, 搅拌至溶解,待用。 试剂二 液体 120mL×1 4℃保存 试剂三 液体 12mL×EP 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、天平、水浴锅、低温离心机、甲苯。 四、土壤淀*酶(S-AL)活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本处理: 取新鲜土样或风干土壤,先粗研磨,过 40 目筛网,待测备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 培养:在 EP 管依次加入: 试剂(μL测定管 对照管 土样(g0.1 0.1 甲苯 40 40 25℃静置 15min 试剂一 1000 试剂二 1000 充分混匀,37℃培养 1h12000rpm25℃离心 10min,上清液待用 ② 酶标仪预热 30min 以上,调节波长为 540nm③ 显色反应:在 EP 管中依次加入: 上清液 200 200 试剂三 100 100 混匀,95℃水浴 5min,待冷却后,取 200μL 96 孔板中, 540nm 处读取吸光值 A,△A=A 测定管-A 对照管。 【注】若A 在零附近徘徊,可增加土样质量(如增至 0.2g),或延长培养时间(如增至 3h 或更长), 则改变后的土样质量和反应时间 T 代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 2.5454x - 0.0704x 为标准品质量(mg/mLy A本试剂盒仅供科研使用 2、酶活单位定义:每克土样每小时催化生成 1μg 葡萄糖为一个酶活力单位。 S-AL(μg/h/g 土样)=[(A+0.0704)÷ 2.5454×103×V]÷W÷T =408.6×(A+0.0704)÷W V---反应总体积,1040μL=1.04mLT--反应时间,1hW--土壤样本实际取样量,g附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. 0.6. 0.7.mg/mL也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 在显色反应阶段,按照测定管加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。 2

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