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土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-06

简要描述:

土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)试剂盒,微板法
蛋白酶是广泛存在于土壤中的一大酶类,它能水解各种蛋白质以及肽类等化合物为氨基酸,因此土壤蛋 白酶的活性与土壤中氮素的转化状况有极其重要的关系。

土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)试剂盒,微板法

土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤酸性蛋白酶(Solid -Acid ProteaseS-ACPT)试剂盒说明书 (货号:WS6130W 微板法 48 样) 一、产品简介: 蛋白酶是广泛存在于土壤中的一大酶类,它能水解各种蛋白质以及肽类等化合物为氨基酸,因此土壤蛋 白酶的活性与土壤中氮素的转化状况有极其重要的关系。 土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)在酸性条件下将酪蛋白水解产生酪*酸;酪*酸与福林酚在碱性条件下反应 生成蓝色化合物;该蓝色物质在 680nm 有特征吸收峰,进而得 S-NPT 酶活,由于底物酪蛋白自身含有多种 氨基酸,所以在检测过程中必须设置带有底物酪蛋白的对照,以扣除有干扰的背景值,排除假阳性二、测试盒组成和配制: 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 试剂一 液体 120mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×2 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部,每瓶加入 3mL 试 剂 三 90℃ 加 热 搅 拌 至 分 散 ( 约 10-20min),再加 12mL 试剂一搅拌至溶解, 最后再加试剂一定容至 30mL,继续搅拌至 全部溶解(约 30min);配置完的试剂 4℃存,三天内用完。 试剂三 液体 10mL×1 4℃保存 用前摇匀 试剂四 液体 60mL×1 4℃保存 用前摇匀 试剂五 液体 35mL×1 4℃保存 用前摇匀 试剂六 液体 8mL×1 棕色瓶 4℃保存 现用现配,临用前加 16mL 蒸馏水, 4℃保存,一星期内用完 标准品 粉体 mg×1 EP 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 【注】:试剂二若在磁力搅拌器(带温控)上溶解,可用锡箔纸或保鲜膜盖住烧杯,以免溶解过程中水分 蒸发过快。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、蒸馏水 四、土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样或者 37 度烘箱风干(需先粗研磨),过 40 目筛网备用。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 680nm② 配制好的试剂二需预先 50℃水浴 10min③ 在 EP 管中依次加入下列试剂培养: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.15g 鲜土 0.1g 干土 0.15g 鲜土 0.1g 干土 试剂一 500 500 试剂二 500 50℃振荡培养 2h,同时,余下的试剂二须单独 50℃振荡培养 2h 上歩单独 50℃培养过的试剂二 500本试剂盒仅供科研使用 2 试剂四 500 500 混匀,立即 1700rpm(须准确),4℃离心 10min,上清液待用 ④ 显色反应:在 EP 管中依次加入: 上清液 200 200 试剂五 300 300 试剂六 200 200 室温静置 20min(若仍浑浊,可以延长静置时间至 30min 1700rpm 离心 10min),取 200μL 96 孔板中,于 680nm 读取吸光值 AA=A 测定管-A 对照管(每个样本做一个对照管)。 【注】:若A 的值在零附近徘徊,可以加样土样取样量(如两倍的土壤质量)。 五、结果计算: 1、标曲线准方程:y = 0.0154x + 0.0015x 是标准品浓度(μg/mL),y ΔA2、单位定义:每小时每克鲜土中产生 1μg 酪*酸为一个酶活力单位。 土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)(μg/h/g 鲜土)=(ΔA-0.0015)÷0.0154×V1÷W1÷T =48.8×(ΔA-0.0015) ÷W1 3、单位定义:每小时每克干土中产生 1μg 酪*酸为一个酶活力单位。 同等质量的鲜土(参与实际反应的鲜土质量)在 105℃烘干,即得相应的干土质量。 土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)(μg/h/g 干土)= (ΔA-0.0015)÷0.0154×V1÷W2÷T =48.8×(ΔA-0.0015) ÷W2 V1---培养步骤中总的反应体积,1500μL =1.5mLT---反应时间,2hW1---样本质量,以实际称取鲜土质量为准; W2---相对应的干土质量。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(100μg/mL):标准品溶解于 100mL 0.1mol/L 的盐酸溶液中(母 液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 4, 8, 12, 16, 20. μg/mL。也可根据实际样本 来调整标准品浓度。 3 依据测定管的显色反应阶段加样表依次加样,根据结果即可制作标准曲线。

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