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土壤纤维素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶试剂盒

更新时间:2024-06-06

简要描述:

土壤纤维素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶试剂盒
纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在土壤纤维素酶作用下,可 以催化纤维素水解生成纤维二糖、葡萄糖等还原糖

土壤纤维素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶试剂盒

土壤纤维素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤纤维素酶(Solid-cellulaseS-CL)活性测定试剂盒说明书 (货号:WS8030F 分光法 48 ) 一、产品简介: 纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在土壤纤维素酶作用下,可 以催化纤维素水解生成纤维二糖、葡萄糖等还原糖,所以,纤维素酶是碳素循环中的一个 重要酶。本试剂盒采用3,5-二硝基水杨酸与终产物还原糖反应生成棕红色物质,在540nm 处有特征吸收峰,进而得到土壤纤维素酶活性。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉体 mg×1 4℃保存 临用前加入 60mL 试剂二,可 80℃水浴,搅拌至溶解,待用。 试剂二 液体 120mL×1 4℃保存 试剂三 液体 30mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅或恒温振荡培养箱、可调式移 液器、蒸馏水。 四、土壤纤维素酶(S-CL)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。 【注】:土壤风干,可减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 培养:在 EP 管依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.3-0.5 0.3-0.5 试剂一 1000 试剂二 1000 充分混匀,40℃培养 24 小时(振荡培养或间隔一段时间手动振 荡混匀几下),12000rpm25℃离心 10min,上清液待用 ② 分光光度计预热 30min 以上,调节波长为 540nm,蒸馏水调零。 ③ 显色反应:在 EP 管中依次加入: 上清液 400 400 试剂三 300 300 混匀,95℃水浴 5min,待冷却后,全部转移到 1mL 玻璃比色皿(光 1cm)中,在 540nm 处读取吸光值 AA=A 测定管-A 对照管。 【注】:1.ΔA 较小,可延长 40℃的孵育时间 T(如 48 小时或更长),或增加土样质 W。则改变后的 V1 或土壤重量 W 需代入计算公式重新计算。 2.若测定管 A 值大于 1.8 A 大于 1歩显色反应步骤中的上清液可用蒸馏 水稀释,则稀释倍数 D 代入公式计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 8.3553x - 0.0094x 为标准品质量(mg),y A2、单位定义:每天每克土样中产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。 土壤纤维素酶(S-CL)活力(μg/d/g 土样)=[(ΔA+0.0094)÷8.3553×103×(V÷V1)]÷W÷T =299.2×(ΔA+0.0094) ÷W V---反应总体积,1000μLV1---显色反应中上清液体积,400μLT---反应时间,24h=1dW---土壤样本实际取样量,g附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的标准品(母液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.18, 0.21, 0.24, 0.27, 0.3. mg/mL也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 在显色反应阶段,按照测定管加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。

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