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土壤甘an酸氨基肽酶(S-GAP)测试盒,微板法

更新时间:2024-05-31

简要描述:

土壤甘an酸氨基肽酶(S-GAP)测试盒,微板法
土壤甘*酸氨基肽酶(S-GAP)是一类能水解肽链 N-末端为甘*酸的酶,由土壤微生 物分泌。

土壤甘an酸氨基肽酶(S-GAP)测试盒,微板法

土壤甘an酸氨基肽酶(S-GAP)测试盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤甘*酸氨基肽酶(Solid-Glycine Aminopeptidase,S-GAP试剂盒说明书 货号: WS7430W 微板法 48 样) 一、产品简介: 土壤甘*酸氨基肽酶(S-GAP)是一类能水解肽链 N-末端为甘*酸的酶,由土壤微生 物分泌。本试剂盒利用土壤甘*酸氨基肽酶(S-GAP)分解甘*酸对硝基苯胺生成对硝 基苯胺,该物质在 405nm 有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算 S-GAP 活性。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存条件 备注 试剂一 液体 60mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下,使试剂落入底 部,再加 5.4mL 乙醇混匀溶解。 试剂三 液体 35mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温振荡培养箱/水浴锅、可调式移液器、天平。 四、土壤甘*酸氨基肽酶(S-GAP)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本处理: 取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。 【注】土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 空白管(仅做一次) 土样(g0.05 0.05 试剂一 400 500 400 试剂二 100 100 充分混匀,37℃培养 2 小时(振荡培养或间隔 20min 手动振荡混匀 几下) 试剂三 300 300 300 混匀,8000rpm 离心 5min(若上清液不澄清可加大离心力),取 200μL 上清液至 96 孔板中,405nm 下读取吸光值 AA= A 测定- A 对照 -A 空白(每个样本做一个自身对照)。 【注】:1.ΔA 较小,可延长 37的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加土样质 W(如增至 0.2g)。则改变后的 T W 需代入计算公式重新计算。 2.若测定管 A 值大于 1.5 A 大于 1.5,可缩短 37的孵育时间 T(如减至 0.5 小时或更短)。 则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对最后一步的待检测上清液(包括测定管、对照管 和空白管)同时用蒸馏水进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.0077x - 0.0024x 为标准品摩尔质量(nmol),y A2、单位定义:每小时每克土样生成 1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。 S-GAP(nmol/h/g 土样)=(ΔA+0.0024)÷0.0077÷W÷T×D=65×(ΔA+0.0024)÷W×D T---反应时间,2hW---土壤样本实际取样量,gD---稀释倍数,未稀释即为 1附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10μmol/mL):临用前甩几下或离心,使粉体落入底部,加入 0.5mL 乙醇,涡旋震荡溶解后再加入 0.5mL 的蒸馏水混匀,得到 10μmol/mL 备用。 2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度:0,0.4,0.8,1.2,1.6, 2μmol/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 EP 管依次加入:50μL 标准品+450μL 试剂一+300μL 试剂三,混匀,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值,根据结果制作标准曲线。

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