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土壤磷酸二酯酶(S-PDE)试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-31

简要描述:

土壤磷酸二酯酶(S-PDE)试剂盒,微板法
土壤磷酸二酯酶(S-PDE,EC 3.1.4.1)是在土壤磷酸单酯酶之后的的第二大磷酸酶。 其在土壤有机磷的循环代谢中起到重要作用。

土壤磷酸二酯酶(S-PDE)试剂盒,微板法

土壤磷酸二酯酶(S-PDE)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤磷酸二酯酶(S-PDE)活性测定试剂盒说明书 (货号:WS0430W 微板法 96 ) 一、产品简介: 土壤磷酸二酯酶(S-PDEEC 3.1.4.1)是在土壤磷酸单酯酶之后的的第二大磷酸酶。 其在土壤有机磷的循环代谢中起到重要作用。 本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的的检测方法。土壤磷酸二酯酶(S-PDE)催化 (4-硝基苯)磷酸酯 (BNPP)生成黄色的产物 PNP,该产物在 405nm 处有最大吸收峰。 通过检测 PNP 405nm 下的增加速率,即可得到 S-PDE 酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 120mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×6 4℃保存 临用前每支甩几下或离心使粉剂落入 底部,每支再加 4mL 蒸馏水充分溶解, 现配先用,两天内用完试剂三 液体 80mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅或恒温培养箱、天平、可调式移液器。 四、土壤磷酸二酯酶(S-PDE)活性测定: 1、样本制备: 取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 405 nm② 在离心管中依次加入下列试剂: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样 0.1g 鲜土或 0.05g 干土 0.1g 鲜土或 0.05g 干土 试剂一 500 500 试剂二 100 37℃(水浴锅或恒温培养箱)振荡反应 1 h 试剂三 400 400 试剂二 100 混匀,12000rpm 室温离心 5min立即取上清液 200μL 96 孔板中,405nm 下读取吸光值 AA= A 测定- A 对照(参考注意事项)。 【注】:1.A 测定超过 1.5,可对最后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释(用水稀释即 可),稀释倍数 D 代入计算公式; 2.ΔA 在零附近徘徊,可延长 37的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加土样质量 W(如 增至 0.2g)。则改变后的 T W 需代入计算公式重新计算。 3.若同时检测同一背景下的土壤样本,此批土壤样本可做做三次样本自身对照管(取平均值作为 这批土壤样本的对照管),节省时间;若是不同背景下的土壤样本(如黑土,红土,黄土等), 则每个样本需做一个自身对照,即按照说明书加样表操作即可,本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.0127x - 0.01x PNP 摩尔质量(nmol), y A2、活性定义:在 37℃,每克土壤每小时水解 BNPP 产生 1nmol PNP 定义为 1 个酶活单位。 S-PDE(nmol/h/g 土样)=[(A+0.01)÷0.0127]÷W÷T×D=78.74×(A+0.01)÷W×D W---土壤样品质量,gD---稀释倍数,未稀释即为 1T---催化反应时间,1 hPNP 相对分子质量---139.11附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10μmol/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解, 若有结晶析出,需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10 μmol/mL。也可根据实际样本 来调整标准品浓度。 3 EP 管中直接加入:10μL 标准品+590μL 试剂一+400μL 试剂三,混匀,立即取上 清液 200μL 96 孔板中,立即于 405nm 下读取吸光值 A4 根据结果制作标准曲线。

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