土壤磷酸二酯酶(S-PDE)试剂盒,微板法

土壤磷酸二酯酶(S-PDE)试剂盒,微板法

土壤磷酸二酯酶(S-PDE)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤磷酸二酯酶（S-PDE）活性测定试剂盒说明书 (货号:WS0430W 微板法 96 样) 一、产品简介： 土壤磷酸二酯酶（S-PDE，EC 3.1.4.1）是在土壤磷酸单酯酶之后的的第二大磷酸酶。 其在土壤有机磷的循环代谢中起到重要作用。 本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的的检测方法。土壤磷酸二酯酶（S-PDE）催化 双(4-硝基苯)磷酸酯 （BNPP）生成黄色的产物 PNP，该产物在 405nm 处有最大吸收峰。 通过检测 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到 S-PDE 酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 120mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×6 支 4℃保存 临用前每支甩几下或离心使粉剂落入 底部，每支再加 4mL 蒸馏水充分溶解， 现配先用，两天内用完。 试剂三 液体 80mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅或恒温培养箱、天平、可调式移液器。 四、土壤磷酸二酯酶（S-PDE）活性测定： 1、样本制备： 取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 405 nm。 ② 在离心管中依次加入下列试剂： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样 0.1g 鲜土或 0.05g 干土 0.1g 鲜土或 0.05g 干土 试剂一 500 500 试剂二 100 37℃（水浴锅或恒温培养箱）振荡反应 1 h 试剂三 400 400 试剂二 100 混匀，12000rpm 室温离心 5min，立即取上清液 200μL 于 96 孔板中，立 即于 405nm 下读取吸光值 A，△A= A 测定- A 对照（参考注意事项）。 【注】：1.若 A 测定超过 1.5，可对最后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释（用水稀释即 可），稀释倍数 D 代入计算公式； 2.若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加土样质量 W（如 增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。 3.若同时检测同一背景下的土壤样本，此批土壤样本可做做三次样本自身对照管（取平均值作为 这批土壤样本的对照管），节省时间；若是不同背景下的土壤样本（如黑土，红土，黄土等）， 则每个样本需做一个自身对照，即按照说明书加样表操作即可，本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 0.0127x - 0.01；x 是 PNP 摩尔质量（nmol）， y 是△A。 2、活性定义：在 37℃，每克土壤每小时水解 BNPP 产生 1nmol PNP 定义为 1 个酶活单位。 S-PDE(nmol/h/g 土样)=[(△A+0.01)÷0.0127]÷W÷T×D=78.74×(△A+0.01)÷W×D W---土壤样品质量，g； D---稀释倍数，未稀释即为 1； T---催化反应时间，1 h； PNP 相对分子质量---139.11。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解， 若有结晶析出，需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 2, 4, 6, 8, 10 μmol/mL。也可根据实际样本 来调整标准品浓度。 3 在 EP 管中直接加入：10μL 标准品+590μL 试剂一+400μL 试剂三，混匀，立即取上 清液 200μL 于 96 孔板中，立即于 405nm 下读取吸光值 A。 4 根据结果制作标准曲线。