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土壤焦磷酸酶(S-PPase)试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-31

简要描述:

土壤焦磷酸酶(S-PPase)试剂盒,微板法
土壤焦磷酸酶(焦磷酸盐磷酸水解酶,EC 3.6.1.1)催化焦磷酸盐水解成正磷酸盐。在 土壤有机磷的矿化和转化中发挥重要作用。

土壤焦磷酸酶(S-PPase)试剂盒,微板法

土壤焦磷酸酶(S-PPase)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤焦磷酸酶活性测定试剂盒说明书 (货号:WS9330W 微板法 96 ) 一、产品简介: 土壤焦磷酸酶(焦磷酸盐磷酸水解酶,EC 3.6.1.1)催化焦磷酸盐水解成正磷酸盐。在 土壤有机磷的矿化和转化中发挥重要作用。 本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的的检测方法。土壤焦磷酸酶催化焦磷酸盐水解 成磷酸盐。可通过在 700nm 处测定生成的无机磷量来确定该酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 【注】:全程操作需无磷环境;试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等,也可以用一次性塑料器皿, 避免磷污染。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、蒸馏水。 四、土壤焦磷酸酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样或者 37 度烘箱风干(需先粗研磨),过 40 目筛网备用。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 700 nm反应 mix 制备:试剂四和五按照要求加蒸馏水溶解后,按试剂三:四:五=10:2:5 的比例依次混合配置(需现配现用,若出现蓝色则需弃掉重新配置)。 ③ 在离心管中依次加入下列试剂: 试剂名称(μL测定管 对照管 土壤样本(g0.1 0.1 试剂一 370 370 试剂二 30 混匀,37℃振荡培养 2h(间隔 30min 振荡混匀一次) 试剂三 200 200 试剂二 30 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 80mL×1 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,再 6.4mL 蒸馏水,混匀溶解备用。 试剂三 液体 65mL×1 4℃保存 试剂四 粉体 mg×1 4℃保存 临用甩几下使试剂落入底部,再 4.2mL 蒸馏水,混匀溶解备用。 试剂五 粉体 mg×7 4℃保存 临用甩几下使试剂落入底部,每 支再加 1.5mL 蒸馏水,混匀溶解 备用,现配现用。 标准品 粉体 1 mL×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂本试剂盒仅供科研使用 2 立即混匀,于 12000rpm,室温或 4℃离心 5min,上 清液需立即测定,不可久置。 ④ 显色反应,在 96 孔板中依次加入: 上清液 50 50 反应 mix 150 150 混匀,室温静置 15min,于 700nm 处读取吸光值 AA=A 测定-A 对照(参看注意事项)。 【注】:1. A 的值在零附近,可延长孵育时间 T(如增至 5h)。 2. 若是同时检测同一背景下的土壤样本(如同一批样本不同时间点的取样), 此批土壤样本可做一个批次的样本自身对照,节省时间。 五、结果计算: 1、标准曲线:y=0.5987x - 0.0003x 是标准品摩尔浓度(μmol/mL), y A2、活性定义:在 37℃,每克土壤每小时水解 1μmol 焦磷酸产生 1μmol 无机磷定义为 1 酶活单位。 土壤焦磷酸酶(μmol/h/g 土样)=(A+0.0003)÷0.5987×V1÷W÷T =0.5×(A+0.0003)÷W V1---孵育阶段整个反应体积:600μL=0.6mLW---土壤样品质量,gT---催化反应时间,2 h附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(5μmoL/mL):标准品用 10mL 蒸馏水溶解。(母液需在两天内用)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:00.20.40.60.81. μmol/mL。也可根 据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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