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土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-30

简要描述:

土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法
α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一类木聚糖降解水解酶,存在于微生物等生物体,促使非 还原末端α-D-木糖残基的水解,释放出α-D-木糖。

土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法

土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤α-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase)测定试剂盒说明书 (货号:WS3330W 微板法 48 样) 一、产品简介: α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一类木聚糖降解水解酶,存在于微生物等生物体,促使非 还原末端α-D-木糖残基的水解,释放出α-D-木糖。 土壤中α-木糖苷酶催化对硝基*酚-α-D-木糖苷产生对硝基*酚(PNP),该产物在 405nm 处有特征吸收峰,通过测定 405nm 光吸收增加速率,即可计算土壤α-木糖苷酶活 性。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部, 再加 1.4mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 液体 6mL×1 4℃保存 试剂三 22mL×1 4℃保存 标准品 粉剂×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、蒸馏水。 四、土壤α-木糖苷酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本的制备: 取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称 测定管 对照管 土样(g0.1 0.1 试剂一(μL25 蒸馏水 25 试剂二(μL55 55 混匀, 45℃振荡反应 30min 试剂三(μL220 220 混匀,12000rpm,离心 10min,取上清液 200μL 96 孔板中,405nm 下读取吸光值 AA= A 测定- A 对照(每个样本需做一个自身对照)。 【注】:1.ΔA 过小,可以增加土样量或延长保温时间(如:60min 或更长),重新调整的 样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。 2.A 测定超过 1.5,可以减少土样量或降低保温时间(如:10min),重新调整的 样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y=0.2647x-0.0058x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA2、单位定义:每小时每克土样中产生 1μg -硝基*酚(PNP)定义为一个酶活力单位。 土壤α-木糖苷酶活性(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.0058)÷0.2647÷W÷T=7.56×(ΔA+0.0058)÷W T---反应时间,30min=0.5hW---实际称取干土质量,gPNP 相对分子质量---139.11附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 EP 管加入:20μL 标准品+5μL 蒸馏水+55μL 试剂二+220μL 试剂三,混匀,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。

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