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土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)试剂盒

更新时间:2024-05-30

简要描述:

土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)试剂盒
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13,Mnp)是真菌分泌的一种糖基化的胞外蛋白,含亚铁血红 素的过氧化物酶,主要存在于引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌这两个担子真菌中,属于木 质素降解酶系

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土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)试剂盒说明书 (货号:WS0330F 分光法 24 样) 一、产品简介: 锰过氧化物酶(EC1.11.1.13Mnp)是真菌分泌的一种糖基化的胞外蛋白,含亚铁血红 素的过氧化物酶,主要存在于引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌这两个担子真菌中,属于木 质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和环境中其他一些抗性物质,如腐殖质酸和包 括多环芳烃在内的多种有机污染物等。 土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)在 Mn2+存在的条件下,将二甲氧基*酚(DMP)氧化生成 的产物在 470nm 处有特征吸收峰。通过检测该产物在 470nm 处的增加速率,即可得到 Mnp 酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 30mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂×1 4℃保存 用前甩几下使粉剂落入底部,再加 8mL 无水乙醇溶解备用。 试剂三 粉剂×1 4℃保存 用前甩几下使粉剂落入底部,再加 3mL 蒸馏水充分溶解备用。 试剂四 液体×1 4℃保存 用前甩几下使液体落入底部,准备 三个新的 EP 管:每管中加入 2µL 体,再加 1mL 蒸馏水混匀备用。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、可调式移液器、天平、 恒温震荡培养箱。 四、土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: 1 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 470nm,蒸馏水调零。 2 所有试剂至常温状态。 3 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.1 0.1 试剂一 400 680 试剂二 280 试剂三 40 40 试剂四 80 80 充分混匀,于 30℃震荡反应 2h,于 12000rpm4℃离心 10min取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿中,读取 470nm 处吸光值 A本试剂盒仅供科研使用 2 A=A 测定管- A 对照管(每个样本需做一个自身对照)。 【注】若A 值较低,可加大土壤样本量或者延长反应时间,则改变后的样本质量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 酶活性定义:每克土壤每天氧化 1nmol DMP 所需酶量为一个酶活力单位。 S-MnP 活性(nmol/d/g 土样)=(A÷ε÷d)×109× V÷W÷T=174.5×A÷W ε---DMP 被氧化的产物的摩尔消光系数:55000L/mol/cmd---96 孔板光径,1cmV---反应总体积,8×10-4 LW---样本质量,gT---反应时间,2h=1/12d

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