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胃蛋bai酶试剂盒

更新时间:2024-05-29

简要描述:

胃蛋bai酶试剂盒
胃*白酶(Pepsin)是一种消化性蛋白酶,由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质 成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症 状时也会引起胃*白酶分泌的减少。

胃蛋bai酶试剂盒

胃蛋bai酶试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 胃*白酶(Pepsin)试剂盒说明书 (货号:WS0121F 分光法 24 ) 一、产品简介: 胃*白酶(Pepsin)是一种消化性蛋白酶,由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质 成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症 状时也会引起胃*白酶分泌的减少。 胃蛋*酶可催化血红蛋白水解生成含酚的氨基酸,含酚的氨基酸与福林酚反应后显蓝 色;其颜色的深浅与胃*白酶活性呈正比。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 液体 5mL×1 4℃保存 试剂二 粉体 mg×2 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,每瓶 再加 13mL 蒸馏水溶解备用。 试剂三 液体 30mL×1 4℃保存 试剂四 液体 6mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 临用前加 2mL 提取液,再用蒸馏水 稀释10倍,即为0.05mg/mL 酪*酸。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液器、天平、 研钵、冰和蒸馏水。 四、胃*白酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4×3500rpm 离心 5min,取 上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 液体样本:液体用提取液按照 1:1 的比例混合稀释后,4℃×3500rpm,离心 5min取上清液检测。 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 680nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温。 ③ 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管本试剂盒仅供科研使用 2 样本 100 100 试剂一 100 37℃孵育 5min 试剂二 500 500 37℃孵育 10min 试剂一 100 37℃孵育 5min 后,3000rpm 离心 5min,上清液待测。 ④ 显色反应,在 EP 管中: 试剂名称(μL测定管 对照管 标准管 (仅做一次) 空白管 (仅做一次) 上清液 120 120 标准品 120 提取液 120 试剂三 600 600 600 600 试剂四 120 120 120 120 37℃孵育 20min 后(若浑浊则室温 3000rpm 离心 5min),全部澄清反应液 1mL 比色皿中,于 680nm 处测定,读取各管的吸光值 A。ΔA=A 测定 -A 对照(每个样本做一个自身对照)。 【注】1. ΔA 在零附近徘徊,可以延长反应时间 T(如 37℃孵育 10min 延长至 20min)或增加样本 V1(如增至 150μL,则试剂二相应减少),则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计 算公式重新计算。 2. A 测定值大于 2,可以减少样本量 V1(如减至 50μL,用提取液相应补充),则改变后的 样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪*酸为 1 个酶活单位(U)胃*白酶(U/mg prot=[ΔA÷A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷A 标准-A 空白)÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 酶活定义:37℃每 g 组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪*酸为 1 个酶活单位(U)胃*白酶(U/g 鲜重)=[ΔA÷A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷A 标准-A 空白)÷W 3、液体 LAP 活力的计算: 酶活定义:37℃每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成1μg酪*酸为1个酶活单位(U)胃*白酶(U/mL=[ΔA÷A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷V1×2÷T =70×ΔA÷A 标准-A 空白) V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.1mLV2---第③歩反应总体积,0.7mLT---反应时间,10minC 标准---50μg/mLW---样本质量,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒;

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