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尿素(Urea)/尿素氮含量(脲酶法),微板法

更新时间:2024-05-28

简要描述:

尿素(Urea)/尿素氮含量(脲酶法),微板法
尿素(Urea)又称碳酰胺,旧称尿素氮(BUN),是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质 代谢分解的主要含氮产物,也是目前含氮量最高的氮肥。

尿素(Urea)/尿素氮含量(脲酶法),微板法

尿素(Urea)/尿素氮含量(脲酶法),微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 尿素(Urea)含量(酶法)检测试剂盒说明书 (货号:WS1021W 微板法 96 样) 一、产品简介: 尿素(Urea)又称碳酰胺,旧称尿素氮(BUN,是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质 代谢分解的主要含氮产物,也是目前含氮量最高的氮肥。 该试剂盒利用尿素在脲酶的作用下水解产生氨离子和二氧化碳,氨离子在碱性介质中 与酚显色剂生成蓝色物质,该物质的生成量与尿素含量成正比。通过于625nm处检测该 有色物质含量进而得出尿素氮含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,再加 1.1mL 的蒸馏水溶解备用。 试剂二 液体 3mL×1 4℃保存 试剂三 试剂三 A×2 试剂三 B×1 4℃保存 临用前向一支试剂三 A 中加入 46μL 的试剂三 B,混匀备用。 标准管 粉体 mg×2 4℃保存 每支临用前加1mL蒸馏水溶解,即浓 度为6mg/mL的尿素,检测前再用蒸馏 水稀释200倍(5:995)即成0.03mg/mL 0.5mmol/L)的尿素。 三、所需仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、天平、移液器、离心机、蒸馏水。 四、尿素(Urea)含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定了解本批样品情况熟悉实验流程避免实 验样本和试剂浪费1样本制备: ① 液体样品:液体样品:澄清的液体可直接检测;若浑浊则离心后取上清液检测。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 理盐水,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm 室温离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min,设置温度在 37℃,设定波长到 625nm② 做实验前选取 2 个样本,找出适合本次检测样本的稀释倍数 D(如:尿液样本可用 蒸馏水稀释 100 倍)。 ③ 所有试剂解冻至室温,在 96 孔板中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称 μL测定管 空白管 (仅做一次) 标准管 (仅做一次) 样本 20 蒸馏水 20 标准品 20 试剂一 10 10 10 蒸馏水 130 130 130 混匀,37℃避光反应 15min 试剂二 20 20 20 试剂三 20 20 20 混匀,37℃避光反应 20min,于 625nm 处读取吸光值 AA=A 测定-A 空白。 【注】:1.测定管的 A 值若超过 1.5,可把样本用生理盐水或蒸馏水进行稀释,稀释倍数 D 代入计 算公式。 2.A 的差值在零附近徘徊,可增加样本加样量 V1(如增至 50μL,则蒸馏水相应减少, 保持总体积不变;空白管和标准管维持不变),则改变后的 V1 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、按液体体积计算: 尿素含量(mg/L)=(C 标准×V )×103×A÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =30×A÷(A 标准-A 空白)×D 尿素含量(mmol/L)=(C 标准×V )÷60.04×103×A÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =0.5×A÷(A 标准-A 空白)×D 2、按细胞数量计算: 尿素含量(ng/104 cell)=(C 标准×V )×106×A÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =60×A÷(A 标准-A 空白)×D 尿素含量(nmol/104 cell)=(C 标准×V )÷60.04×106×A÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =A÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---尿素标品浓度,0.03mg/mLD---稀释倍数,未稀释即为 1V1---加入样本体积,0.02mLV ---加入标准品体积,0.02mLV---提取液体积,1mL60.04---尿素分子量; 500---细胞数量,万。

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