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鸟an酸转氨酶(OAT)试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-28

简要描述:

鸟an酸转氨酶(OAT)试剂盒,微板法
鸟*酸转氨酶(OAT,EC 2.6.1.13)是以鸟*酸为前体合成脯*酸的关键酶, 对植物 适应逆境胁迫起关键作用

鸟an酸转氨酶(OAT)试剂盒,微板法

鸟an酸转氨酶(OAT)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 鸟*酸转氨酶(OAT)测定试剂盒说明书 (货号:WS7011W 微板法 96 样) 一、产品简介: 鸟*酸转氨酶(OATEC 2.6.1.13)是以鸟*酸为前体合成脯*酸的关键酶, 对植物 适应逆境胁迫起关键作用 鸟*酸转氨酶(OAT)在底物鸟*酸和α-酮戊二酸存在下,使鸟*酸脱氨并伴随着 NADH 的氧化,通过检测 NADH 340nm 处吸光值的下降量,即可计算得出鸟*酸转 氨酶的酶活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、鸟*酸转氨酶(OAT)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费! 1、 样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆,12000rpm4℃离心 10min,取上清液待用。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:澄清的液体样本直接检测,若浑浊则离心后取上清检测。 2、 上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm② 所有试剂解冻至室温。 ③ 在 96 孔板依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 20 试剂一 10 试剂二 20 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×3 4℃保存 临用前甩几下,使粉体落到底部, 再加入 0.5mL 蒸馏水溶解备用,用 不完的试剂分装后-20℃保存,禁 反复冻融,三天内用完。 试剂二 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下,使粉体落到底部, 再加入 5mL 蒸馏水溶解备用 试剂三 液体 14mL×1 4℃保存 试剂四 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下,使粉体落到底部, 再加入 5mL 蒸馏水溶解备用本试剂盒仅供科研使用 2 试剂三 130 室温(25℃)放置 5min 试剂四 20 混匀,立即于 340nm 处检测,10s 时读取 A115min 后读取 A2,△A= A1-A2【注】1.若A 的值在零附近,可以适当延长反应时间到 30min 后或更长读取 A2,改变后的反应时 间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量,则改变后的加样体积需代入计算公式 重新计算。 2. 若起始值 A1 太大如超过 2(如颜色较深的植物叶片,一般色素较高,则起始值相对会偏 高),可以适当减少样本加样量,则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。 或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 12000rpm, 4℃离心 10min,上清液用于检测; 3. 若下降趋势不稳定,可以每隔 20S 读取一次吸光值,选取一段线性下降的时间段来参与 计算,相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 单位定义:每毫克组织蛋白每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 OAT 活力(nmol/min/mg prot=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(V1×Cpr) ÷T =214.4×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 单位定义:每克组织每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 OAT 活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(W×V1÷V)÷T =214.4×ΔA÷W 3、按细菌/细胞数量计算: 单位定义:每 104个细胞每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位(U)。 OAT 活力(nmoL/min/104 cell)= [ΔA×V2÷ε×d×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.43×ΔA 4、液体中 OAT 活力的计算: 单位定义:每毫升液体每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 OAT 活力(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷V1÷T =214.4×ΔA V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.02mLV2---反应体系总体积,2×10-4 Ld---96 孔板光径,0.5cmε---NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmW---样本质量,g500---细菌或细胞数量; T---反应时间,15minCpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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