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γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-28

简要描述:

γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒,微板法
4-氨基丁酸(GABA)广泛分布在动植物体中。在动物体内 GABA 几乎只存在于神经 组织中。在植物中如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有 G A B A, 且与植物的环境应激反应有关。

γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒,微板法

γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒说明书 (货号:WS6011W 微板法 96 样) 一、产品简介: 4-氨基丁酸(GABA)广泛分布在动植物体中。在动物体内 GABA 几乎只存在于神经 组织中。在植物中如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有 G A B A且与植物的环境应激反应有关。 4-氨基丁酸(GABA)在碱性溶液中与次氯酸盐和*酚反应生成蓝绿色物质,通过检 测该有色物质在 645nm 波长处的值,即可得出样本中 GABA 的含量。 二、试剂盒的组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 液体 40mL×1 4℃保存 试剂二 液体 10mL×1 4℃保存 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。 四、γ-氨基丁酸(GABA)含量测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中,加入 1mL 提取液,在冰上进行匀浆,12000rpm4℃或室温离心 10min,取上清液待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:澄清的液体样本直接测定,若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 645 nm② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 50 50 试剂一 30 330 试剂二 100 试剂三 200 混匀,沸水浴(95-100℃)10min,冰浴至室温,呈现蓝绿 色颜色,若浑浊需 12000rpm 离心 5min,取澄清的 200μL本试剂盒仅供科研使用 2 96 孔板中,于 645nm 处读取各管的 A 值。△A=A 测定 -A 对照(每个样本需做一个自身对照)。 【注】1.若测定管的 A 值大于 0.6,则需将样本进行稀释(用蒸馏水稀释),稀释 倍数 D 需代入计算公式重新计算。 2.若 A 测定-A 对照的差值在零附近徘徊,则可增加样本取样量(如增至 0.2g), 则取样质量 W 代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.0102x - 0.0003x 为标准品质量(μg)y 为吸光值ΔA2、按样本质量计算: GABA 含量(μg/g 重量)=[(ΔA+0.0003)÷0.0102]÷(W×V1÷V)×D =1960.8×(ΔA+0.0003) ÷W×D 3、按细胞数量计算: GABA 含量(μg/104 cell)=[(ΔA+0.0003)÷0.0102]÷(500×V1÷V)×D =3.922×(ΔA+0.0003)×D 4、液体中 GABA 含量计算: GABA 含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0003) ÷0.0102]÷V1×D=1960.8×(ΔA+0.0003)×D V---提取液体积,1mLV1---样本加入体积,0.05mLD---稀释倍数,未稀释即为 1W---样本取样质量; 500---细胞数量,万。 附:标准曲线制作过程: 1 标准品母液(2mg/mL):标准品临用前加 1mL 蒸馏水溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL。也可根据实际样本来调整 标准品浓度。 3 按照测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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