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4-香豆酸fu酶A连接酶(4CL)试剂盒

更新时间:2024-05-27

简要描述:

4-香豆酸fu酶A连接酶(4CL)试剂盒
4-香豆酸:*酶 A 连接酶(4CL ,EC 6.2.1.12)是木质素生物合成的关键酶之一,位于苯丙酸途径与木质素特异合成途径的转折点上,主要催化肉桂酸生成相应的肉桂酸*酶 A酯。

4-香豆酸fu酶A连接酶(4CL)试剂盒

4-香豆酸fu酶A连接酶(4CL)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 11 4-香豆酸:辅酶 A 连接酶( 4-coumarate:CoA ligase4CL) 试剂盒说明书 (货号:WS3001F 分光法 48 样) 一、产品简介: 4-香豆酸:*酶 A 连接酶(4CL EC 6.2.1.12)是木质素生物合成的关键酶之一,位于 苯丙酸途径与木质素特异合成途径的转折点上,主要催化肉桂酸生成相应的肉桂酸*酶 A 酯。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程 中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。 4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA,在 333nm 下测 4-香豆酸 CoA 生成速率, 即可反映 4CL 活性。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 28mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂×1 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,再加 5mL 馏水,于 80-100℃水浴 1-2 分钟溶解备用。 试剂三 粉剂×1 -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,再加 4.1mL 蒸馏水充分溶解备用。 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、低温台式离心机、可调式移液器、 研钵、冰和蒸馏水。 四、4-香豆酸:辅酶 A 连接酶( 4CL)活性测定: 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 细菌或培养细胞 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 4×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照数量(104):提取液体积(mL)500-10001 的比例进行提取 ③ 液体样本:若是澄清液体,直接检测,若液体样本浑浊,需 4×12000rpm,离心 10min,取上清液检测。 2上机检测: 1 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 333nm,蒸馏水调零。 2 所有试剂至常温状态。 3 1mL 石英比色皿中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 80 试剂一 560本试剂盒仅供科研使用 22 试剂二 80 试剂三 80 混匀,室温(25℃)下立即于 333nm 处读取吸 光值 A130min 后再读取 A2A=A2-A1【注】1. A 在零附近徘徊,可加大样本量(如增至 160μL,则试剂一相应减少),或延长 反应时间 T,则改变后的样本体积 V1 T 需代入公式重新计算。 2. 若上升趋势不稳定,可每隔 2min 读取一次吸光值,选取一段线性上升时间段来参与 计算,相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟使吸光值变化 0.005 所需的酶量定义为一个酶活力单位。 4CL(U/mg prot)=ΔA÷(V1×Cpr)÷0.005÷T=83.3×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织每分钟使吸光值变化 0.005 所需的酶量定义为一个酶活力单位。 4CL(U/g 鲜重)=ΔA÷(W×V1÷V)÷0.005÷T=83.3×ΔA÷W 3、按细菌或细胞密度计算: 酶活定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟使吸光值变化 0.005 所需的酶量定义为一个酶活单位。 4CL(U/104 cell)=ΔA÷(500×V1÷V)÷0.005÷T=0.17×ΔA 4、按液体体积计算: 酶活定义:每毫升液体每分钟使吸光值变化 0.005 所需的酶量定义为一个酶活单位。 4CL(U/mL)=ΔA÷V1÷0.005÷T=83.3×ΔA V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.08 mLT---反应时间,30minW---样本质量,g500---细菌或细胞总数,500 万。 Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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