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脂肪酸合成酶(FAS)试剂盒

更新时间:2024-05-27

简要描述:

脂肪酸合成酶(FAS)试剂盒
脂肪酸合成酶(FAS,EC 2.3.1.85)是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

脂肪酸合成酶(FAS)试剂盒

脂肪酸合成酶(FAS)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 脂肪酸合成酶(Fatty acid synthetaseFAS)试剂盒说明书 (货号:WS3290F 紫外法 24 样) 一、产品简介: 脂肪酸合成酶(FASEC 2.3.1.85)是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺 和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。 FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+NADPH 340nm 有吸收峰,通过测定 340nm 光吸收下降速率,进而计算 FAS 活性大小。 二、测试盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 50mL×1 4℃保存 用前摇匀再用。 试剂一 粉剂 mg×1 -20℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,加 0.6mL 蒸馏水溶解备用。用不完的试剂 分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 试剂二 粉剂 mg×2 -20℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,分 别加 0.3mL 蒸馏水溶解备用。用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融, 一周内用完。 试剂三 液体 18mL×1 4℃保存 试剂四 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,加 0.6mL 蒸馏水溶解备用。用不完的试剂 分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、 研钵、冰。 四、脂肪酸合成酶(FAS)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的果实样本可取 0.2-0.3g),加入 1mL 提取液(用前摇匀再 用),进行冰浴匀浆,13000rpm4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm 4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 2、上机检测1 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 2 所有试剂解冻至室温(25℃),在 1mL 石英比色皿(光径 1cm)中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 60 试剂一 20本试剂盒仅供科研使用 2 试剂二 20 试剂三 580 混匀,室温(25℃)孵育反应 10min试剂四 20 混匀,室温(25℃)于 340nm 处立即读取 A115min 后读取 A2A=A1-A2【注】1. 若△A 值低于 0.008,可增加样本加样体积 V1(如增至 100μL,则试剂三相应减少,单需控 A1 值低于 2)或延长孵育时间(如延长至 30min)再读取 A2 值。 2. A1 值超过 2,需减少样本加样体积 V1(如减至 40μL,则试剂三相应增加),且△A 应小 0.33. 若下降趋势不稳定,可以每隔 20S 读取一次吸光值,选取一段线性下降的时间段来参与计算, 相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 单位定义:每毫克组织蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 定义为一个酶活单位。 FAS(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=125×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 单位定义:每克组织在每分钟内氧化 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 FAS(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=125×ΔA÷W 3、按细菌/细胞数量计算: 单位定义:每 104个细胞在每分钟内氧化 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 FAS(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.25×ΔA V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.06mLV2---反应体系总体积,7×10-4 Ld---光径,1cmε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmW---样本质量,gT---反应时间,15min500---细胞数量,百万; Cpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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