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多功能氧化酶(MFO)试剂盒

更新时间:2024-05-24

简要描述:

多功能氧化酶(MFO)试剂盒
多功能氧化酶 (MFO)是生物体内重要的一种解毒酶,可使昆虫适应植物的变化;减弱或免受植物诱导抗性产生的有毒次生物质对昆虫的毒害。

多功能氧化酶(MFO)试剂盒

多功能氧化酶(MFO)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 多功能氧化酶 (MFO)活性测定说明书 (货号:WS5190F 分光法 48 样) 一、产品简介: 多功能氧化酶 (MFO)是生物体内重要的一种解毒酶,可使昆虫适应植物的变化;减弱或 免受植物诱导抗性产生的有毒次生物质对昆虫的毒害。 多功能氧化酶(MFO)催化对硝基苯甲醚产生对硝基*酚,该产物在 405nm 下有特征吸 收峰,通过检测该物质在 405nm 处的光吸收增加速率,进而得出 MFO 活性大小。 二、试剂盒的组成和配制: 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液 器、研钵、冰和蒸馏水。 四、多功能氧化酶 (MFO)活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 提取液 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×2 4℃保存 每支用前甩几下使试剂落入底部,分 别加入 1.4mL 乙醇,*全溶解后备 用,现配现用。 试剂二 液体 15mL×1 4℃保存 试剂三 粉体 mg×2 -20℃保存 临用前甩几下或离心使试剂落到底 ,每支加 2.7mL 蒸馏水溶解,用不 完的试剂分装后-20保存,禁止反 复冻融,三天内用完。 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 试剂名称(μL测定管 样本 250本试剂盒仅供科研使用 2 【注】:若ΔA 小于 0.005,可增加样本量 V1(如增至 300μL,则试剂二相应减少),或增加取样质量 W(如增至 0.2g),则改变后的样本量 V1 和样本质量 W 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 3.8038x-0.0009PNP 摩尔浓度(μmoL/mL),y A2、按样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织每分钟产生 1nmoL 的对硝基*酚(PNP)为 1 个酶活单位。 MFO(nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(W×V1÷V)÷T =8.8×(ΔA+0.0009)÷W 3、按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmoL 的对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。 MFO(nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(V1×Cpr)÷T =8.8×(ΔA+0.0009)÷Cpr 4、按细胞数量计算: 酶活定义:每 104个细胞每分钟产生 1nmoL 的对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。 MFO(nmoL/min/104cell)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(500×V1÷V)÷T =0.018×(ΔA+0.0009) 5、按液体体积计算: 酶活定义:每毫升液体每分钟产生 1nmoL 的对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。 MFO(nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷V1÷T=8.8×(ΔA+0.0009) V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.25mLT---反应时间,30 minW---样本质量,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的蛋白含量测定试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10μmoL/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:00.060.120.180.240.3 μmoL/mL也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。 试剂一 50 试剂二 300 试剂三 100 混匀,立即于 405nm 处读取吸光值 A137℃孵育 30min 后读取 A2ΔA=A2-A1

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