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游离胆gu醇(FC)含量试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-24

简要描述:

游离胆gu醇(FC)含量试剂盒,微板法
游离胆*醇(FC)不仅参与形成细胞膜,而且是合成胆汁酸,维生* D 以及甾体激素 的原料。

游离胆gu醇(FC)含量试剂盒,微板法

游离胆gu醇(FC)含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 游离胆*醇(free cholesterol, FC)含量试剂盒说明书 (货号:WS1190W 微板法 96 样) 一、产品简介: 游离胆*醇(FC)不仅参与形成细胞膜,而且是合成胆汁酸,维生* D 以及甾体激素 的原料。其血清浓度可作为脂代谢的指标。 游离胆*醇(FC)在胆*醇氧化酶作用下被氧化生成 4-胆甾烯酮和 H2O2;接着与 4- 氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物,其在 510nm处有特征吸收峰,通过检测 510nm 处吸光值即可得出 FC 含量。 二、试剂盒的组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,再 3.2mL 蒸馏水,充分震荡溶解 试剂二 液体 9mL×1 4℃保存 试剂三 液体 6mL×1 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 4℃保存 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。 四、游离胆*醇(FC)含量测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中,加入 1mL 提取液,在冰上进行匀浆,12000rpm4℃或室温离心 10min,取上清液待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:澄清的液体样本直接测定,若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 510 nm② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL) 测定管 标准管 (仅做一次) 空白管 (仅做一次) 标准品 40 样本 40 试剂一 30 30 30 试剂二 70 70 110本试剂盒仅供科研使用 2 试剂三 60 60 60 混匀,避光孵育 60min,于 510nm 处读取各管吸光值 A【注】若测定管的 A 值大于 1,则需将样本进行稀释(用提取液稀释)或减少样本加样量 V1(如减至 20μL则试剂二相应增加),稀释倍数 D 或样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本质量计算 FCμg/g 重量)=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =193.3×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D 2、按细胞数量计算: FCμg/104 cell=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D =0.39×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ×D 3、液体中 FC 含量计算: FCμg/mL=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =193.3×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) C 标准---0.5μmol/mLMr=386.6---胆*醇分子量; V1---样本加入体积,0.04mLV2---标准品加入体积,0.04mLV---提取液体积,1mLD---稀释倍数; 500---细胞数量; W---样本取样质量。

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