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甘油三酯(TG)含量试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-24

简要描述:

甘油三酯(TG)含量试剂盒,微板法
甘油三酯(TG)是三分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。

甘油三酯(TG)含量试剂盒,微板法

甘油三酯(TG)含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 甘油三酯(triglyceride, TG)含量测定试剂盒说明书 (货号:WS0190W 微板法 96 样) 一、产品简介: 甘油三酯(TG)是三分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成 分,也是重要呼吸底物。 甘油三酯(TG)被脂蛋白脂肪酶水解为甘油和游离脂肪酸。甘油接着被甘油激酶(GK) 的催化生成甘油-1-磷酸(G-1-P)G-1-P 被甘油磷酸氧化酶(GPO)氧化生成过氧化氢 (H2O2)(H2O2)4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物,其在 510nm 处有特征吸 收峰,通过检测 510nm 处吸光值即可得出 TG 含量。 二、试剂盒的组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,再加 2.2mL 蒸馏水,充分震荡溶解备用。 试剂二 液体 10mL×1 4℃保存 试剂三 粉剂 mg×1 -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,再加 2.1mL 蒸馏水,充分震荡溶解备用。 试剂四 液体 6mL×1 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 4℃保存 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。 四、甘油三酯(TG)含量测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中,加入 1mL 提取液,在冰上进行匀浆,12000rpm4或室温离心 10min,取上清液待测。 【注】:若组织样本为高脂样本或部分为高脂样本,需用无水乙醇进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃或室温离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:澄清的液体样本直接测定,若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min,调节波长到 510 nm② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 在 96 孔板中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称(μL测定管 标准管 (仅做一次) 空白管 (仅做一次) 标准品 20 样本 20 试剂一 20 20 20 试剂二 80 80 100 试剂三 20 20 20 试剂四 60 60 60 混匀,室温(25℃)避光孵育 30min,于 510nm 读取各管 A 值。 【注】1. 若测定管的 A 值大于 0.3,则可将样本进行稀释(用提取液稀释)或减少样本加样量 V1(如 减至 10μL,则试剂二相应增加),稀释倍数 D 或样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 2. 若样本为血清,蛋黄(需用乙醇提取)等高 TG 样本,可把样本 V1 降为 2.5μL,另用 17.5μL 蒸馏水补齐,再按照上述加样表操作测定,则改变后的 V1 需带入公司计算。 3. 若样本自身含有高的甘油背景值或者含有高的抗氧化物质(如 VC 等),需要增设一个样本 自身对照(即 20μL+100μL 试剂二+20μL 试剂三+60μL 试剂四,避光反应 20min,510nm 取吸光值 A),测定管减去对照管,代入计算公式计算。 五、结果计算: 1、按样本质量计算: TG(μg/g 重量)=(C 标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =500×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D 2、按细胞数量计算: TG(μg/104 cell)=(C 标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D =(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ×D 3、液体中 TG 含量计算: TG(μg/mL)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =500×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D TG(mmol/L)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1÷Mr×D =0.782×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---标品浓度,0.5mg/mL=500μg/mLMr---甘油三酯分子量,639V---提取液体积,1mLV1---样本加入体积,0.02mLV2---标准品加入体积,0.02mLD---稀释倍数,未稀释即为 1500---细胞数量; W---样本取样质量,g

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