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总胆gu醇(TC)含量试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-24

简要描述:

总胆gu醇(TC)含量试剂盒,微板法
总*固醇(TC)包括游离*固醇和胆*醇酯。是指组织中所有脂蛋白所含胆*醇之总和。

总胆gu醇(TC)含量试剂盒,微板法

总胆gu醇(TC)含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 总胆*醇(total cholesterolTC)含量试剂盒说明书 (货号:WS9090W 微板法 96 样) 一、产品简介: 总*固醇(TC)包括游离*固醇和胆*醇酯。是指组织中所有脂蛋白所含胆*醇之总和。 利用酯酶催化胆*醇酯水解生成游离胆*醇(FC),FC 在胆*醇氧化酶作用下被氧 化生成 4-胆甾烯酮和 H2O2;接着与 4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物,其在 510nm 处有特征吸收峰,通过检测 510nm 处吸光值即可得出 TC 含量。 二、试剂盒的组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 25mL×1 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 4℃保存 标准品浓度为 5.17mmol/L三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、乙醇、离心机、研钵、蒸馏水。 四、总胆*醇(TC)含量测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中,加入 1mL 乙醇,进行冰浴匀浆,12000rpm4℃ 或室温离心 10min,取上清液待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 乙醇,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:澄清的液体样本直接测定,若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 510 nm② 所有试剂解冻至室温(25℃),在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 标准管 (仅做一次) 空白管 (仅做一次) 样本 2.5 标准品 2.5 蒸馏水 2.5 试剂一 250 250 250 混匀,37℃孵育 10min,于 510nm 处读取各管吸光值 A【注】1.若测定管的 A 值大于 1,则需将组织或细胞样本用乙醇进行稀释(若是液体样本如血清需 用生理盐水或 PBS 或蒸馏水稀释),稀释倍数 D 需代入公式重新计算。 2.A 测定管值低于空白管,可增加样本加样体积 V1(如增至 5μL 或更多,则试剂一保 持不变,标准品仍为 2.5μL,额外加 2.5μL 蒸馏水补齐);或增加样本取样质量 W(如增至 0.2g 或更多),则改变的 V1 W 则代入公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、按样本质量计算: TC(μg/g 重量)=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =1998.7×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D 2、按细胞数量计算: TC(μg/104 cell)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =4×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D 3、液体中 TC 含量计算: TC(μg/mL)=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =1998.7×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D TC(mmol/L)=(C 标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =5.17×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---5.17mmol/LMr=386.6---胆*醇分子量; V1---样本加入体积,0.0025mLV2---标准品加入体积,0.0025mLV---提取液体积,1mLD---稀释倍数,未稀释即为 1500---细胞数量,万; W---样本取样质量,g

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