更新时间:2024-05-24
植物硝态氮/硝酸盐含量试剂盒,微板法硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况,可作为土壤氮肥的指标。
植物硝态氮/硝酸盐含量试剂盒,微板法
植物硝态氮/硝酸盐含量试剂盒,微板法
本试剂盒仅供科研使用 1 植物硝态氮试剂盒说明书 (货号:WS9040W 微板法 96 样) 一、产品简介: 硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况,可 作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量,不仅能够反映出植物的氮素营养情况, 而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。 在浓酸条件下,NO3-与水杨酸反应,生成硝基水杨酸,硝基水杨酸在强碱条件下呈黄色, 该黄色物质在 410nm 处有最大光吸收,通过比色测定进而计算得植物硝态氮含量。 二、试剂盒的组成和配制: 【 注】:粉剂量在 mg 级别,使用前用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、天平、常温离心机、水浴锅、可调式移液器、浓硫酸。 四、植物硝态氮含量测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g,加入 1mL 蒸馏水,室温匀浆后,置于沸水浴中浸提 30min(期间不断晃 动),待冷却后于 25℃,12000rpm 离心 15min,取上清待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌/细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水; 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次), 置于沸水浴中浸提 30min(期间不断晃动),待冷却后于 25℃,12000rpm 离心 15min, 取上清待测。 [注]:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: 1 酶标仪预热 30min,调节波长至 410nm。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL) 测定管 空白管(仅做一次) 样本 10 蒸馏水 10 试剂一 40 40 室温(25℃)反应 10min 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂×4 支 4℃保存 用前甩几下或 4℃离心使试剂落入试管底部,每 支再加 1.3mL 浓硫酸充分溶解,4℃避光保存 1 周。 试剂二 液体100mL×1瓶 4℃保存 标准品 自备 若重新做标曲,则用到该试剂。本试剂盒仅供科研使用 2 试剂二 (沿着管壁务必缓慢加入) 950 950 混匀,取 200μL 于 96 孔板中,410nm 处读取吸光值 A, △A=A 测定管-A 空白管。 【注】试剂一和试剂二含有强酸强碱物质,需做好实验防护措施,谨慎操作! 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.4165x + 0.003;x 为标准品浓度(μg),y 为吸光值△A。 2、按样本质量计算: 硝态氮(NO3 -N) 含量 (μg/g 鲜重)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷(W×V1÷V) =240.1×(△A-0.003)÷W 3、按细胞数量计算: 硝态氮(NO3 -N) 含量 (μg/104 cell)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷(500×V1÷V) =0.48×(△A-0.003) 4、按照液体体积计算: 硝态氮(NO3 -N) 含量 (μg/mL)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷V1=240.1×(△A-0.003) V---加入提取液体积,1mL; V1---样本的加样体积,10μL =0.01mL; 500---细胞数量,百万; W---样本质量,g。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(500μg/mL):称量 3.61mg 的硝酸钾入 EP 管中,再加 1mL 蒸馏水 充分溶解(母液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 40, 80, 120, 160, 200. μg/mL。也可根据实 际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样顺序操作,根据结果即可制作标准曲线。