产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 微板法 > 天冬酰胺酶(ASNase)活性测定试剂盒,微板法

天冬酰胺酶(ASNase)活性测定试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-24

简要描述:

天冬酰胺酶(ASNase)活性测定试剂盒,微板法
天冬酰胺酶(EC 3.5.1.1,ASNase)是一种酰胺水解酶,能够将 L-天冬酰胺脱去氨基生成 L-天冬氨酸和氨。

天冬酰胺酶(ASNase)活性测定试剂盒,微板法

天冬酰胺酶(ASNase)活性测定试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 天冬酰胺酶(Asparaginase, ASNase) 活性测定试剂盒说明书 (货号:WS5340W 微板法 96 ) 一、产品简介: 天冬酰胺酶(EC 3.5.1.1ASNase)是一种酰胺水解酶,能够将 L-天冬酰胺脱去氨基 生成 L-天冬氨酸和氨。该酶具有抗肿瘤活性,在食品和医药等领域应用十分广泛。 天冬酰胺酶(ASNase)催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨,利用氨在强碱的环境下与 次氯酸盐和*酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸 收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 液体 20mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×2 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,每瓶再 11mL 蒸馏水溶解备用。 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 试剂四 液体 12mL×1 4℃保存 试剂五 液体 6mL×1 4℃保存 试剂六 A:液体 3.5mL×4 B:液体μL×1 4℃保存 临用前取 30μL B 液进一瓶 A 液中, 混匀后作为试剂六使用。混匀后的试剂 六一周内用完。 标准管 液体 mL×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该标曲。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。 四、天冬酰胺酶(ASNase)活性测定: 1、样本制备: ① 组织样本:称取约 0.1g 组织(水分足的样本可取 0.2-0.5g),加入 1mL 提取液;进行 冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取。 ② 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细 胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s重复 30 次);12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 630nm② 所有试剂解冻至室温(25℃),在 EP 管依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 40 40 试剂一 100 100 试剂二 100 试剂三 100 混匀,放入 37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 1h 试剂二 100本试剂盒仅供科研使用 2 试剂三 100 混匀,室温 12000rpm 离心 10min,上清液待测。 ③ 显色反应:在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 上清液(上步反应) 30 30 蒸馏水 30 30 试剂四 60 60 试剂五 30 30 试剂六 60 60 充分混匀,37℃放置 20min 后,于 630nm 处读取吸光值 AΔA=A 测定管-A 对照管(每个样本做一个自身对照)。 【注】1. 试剂四和五和六需分开加,不能事先混匀。 2. ΔA 的值较小,可增加 37℃孵育时间(如增至 2 小时或更长),或在显色阶段增加上清液量 V1(如增至 60μL,则蒸馏水体积相应减少);则改变后的 T V1 需代入计算公式重新计算。 3. A 测定大于 1.5,可减少 37℃孵育时间(如减至 0.5 小时或更短),或在显色阶段减少上清 液量 V1(如减至 15μL,则蒸馏水体积相应增加);则改变后的 T V1 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程为 y = 3.229x - 0.0118x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA2、按样本蛋白浓度计算: 单位定义:每毫克蛋白质每小时催化天冬酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。 ASNase (μg/h/mg prot)=(ΔA+0.0118)÷3.229×(V2÷V3)÷(V1×Cpr)÷T=87.75×(ΔA+0.0118)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 单位定义:每克组织每小时催化天冬酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。 ASNase (μg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.0118)÷3.229×(V2÷V3)÷(W×V1÷V)÷T=87.75×(ΔA+0.0118)÷W 4、按细胞数量计算: 单位定义:每 104个细胞每小时催化天冬酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。 ASNase (μg/h/104 cell)=(ΔA+0.0118)÷3.229×(V2÷V3)÷(500×V1÷V)÷T=0.18×(ΔA+0.0118)÷W 5、按照液体体积计算: 单位定义:每毫升液体每小时催化天冬酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。 ASNase (μg/h/mL)=(ΔA+0.0118)÷3.229×(V2÷V3)÷V1÷T=87.75×(ΔA+0.0118)÷W V---提取液体积,1mLV1----加入②歩反应体系中样本体积,0.04mLV2---②歩反应体系总体积:0.34mLV3---③歩显色步骤中上清液体积,0.03mLT---反应时间,1hW---样本质量; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 标准品母液(10μg/mL 的氨),把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。 2 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
上海宇淳生物科技有限公司

上海宇淳生物科技有限公司

地址:上海市南航公路1981弄72号

版权所有:上海宇淳生物科技有限公司  备案号:沪ICP备19012414号-1  总访问量:180835  站点地图  技术支持:环保在线  管理登陆