蛋白含量(SP)试剂盒(考马斯亮蓝法),微板法

蛋白含量(SP)试剂盒(考马斯亮蓝法),微板法

蛋白含量(SP)试剂盒(考马斯亮蓝法),微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 考马斯亮蓝法测蛋白含量试剂盒说明书 （货号：WS7140W 微板法 96 样） 一、产品简介： 在酸性溶液中，考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物；经光谱扫描，该蓝 色复合物在 600nm 处有最大吸收峰，在一定的蛋白浓度范围（1-1000μg/mL）内，其颜 色的深浅与蛋白质的含量成正比。 二、测试盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 20mL×1 瓶 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、离心机、可调式移液器、研钵和蒸馏水。 四、蛋白含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 1 组织样本： 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液（提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐 水）冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。 【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实 验前可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 2 细菌或细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液；超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实 验前可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 3 液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。 【注】：依据研究经验，一般需将样本稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实验前 可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30 min 以上，设定波长为 600nm。 ② 在 96 孔板中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 空白管(只做一次) 待测液 40 蒸馏水 40 试剂一 200 200 混匀，,置于室温（25℃）静置 10min，600nm 处测定吸光值 A （5~15min 完成比色），△A= A 测定管-A 空白管。 【注】：1.确保蛋白浓度在 0~100µg/ml 范围内，否则需要做相应稀释，即最好使 A 测定的值低于 1.2；稀 释倍数 D 带入公式计算。 2.去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和 0.1mol/L 的 NaOH 溶液对该实验会有影响。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 3.8457x + 0.0136；x 是标准品浓度（mg/mL），y 是△A。 2、蛋白含量 (mg/g 鲜重)=[(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷(W×V1÷V)×D =0.26×(△A-0.0136)×D÷W 3、蛋白含量(mg/mL)= [(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷V1×D=0.26×(△A-0.0136)×D V---提取液体积：1mL； V1---加入粗提液体积：0.04mL； W---样本质量：g； D---稀释倍数，未稀释即为 1。 附：标准曲线制作过程： 1 标准品母液（0.5mg/mL）。 2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL。 也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。