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蛋白含量(SP)试剂盒(考马斯亮蓝法),微板法

更新时间:2024-05-24

简要描述:

蛋白含量(SP)试剂盒(考马斯亮蓝法),微板法
在酸性溶液中,考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物;经光谱扫描,该蓝色复合物在 600nm 处有最大吸收峰,在一定的蛋白浓度范围(1-1000μg/mL)内,其颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。

蛋白含量(SP)试剂盒(考马斯亮蓝法),微板法

蛋白含量(SP)试剂盒(考马斯亮蓝法),微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 考马斯亮蓝法测蛋白含量试剂盒说明书 (货号:WS7140W 微板法 96 样) 一、产品简介: 在酸性溶液中,考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物;经光谱扫描,该蓝 色复合物在 600nm 处有最大吸收峰,在一定的蛋白浓度范围(1-1000μg/mL)内,其颜 色的深浅与蛋白质的含量成正比。 二、测试盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 20mL×1 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、离心机、可调式移液器、研钵和蒸馏水。 四、蛋白含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 1 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液(提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐 水)冰浴匀浆,12000rpm4℃离心 10min,取上清,即待测液。 【注】:依据研究经验,一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定,如 10 倍。实 验前可以先选 2 个样本测定,摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 2 细菌或细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液;超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:依据研究经验,一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定,如 10 倍。实 验前可以先选 2 个样本测定,摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 3 液体样本:澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊,离心后取上清检测。 【注】:依据研究经验,一般需将样本稀释到适当倍数再进行测定,如 10 倍。实验前 可以先选 2 个样本测定,摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min 以上,设定波长为 600nm② 在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 空白管(只做一次) 待测液 40 蒸馏水 40 试剂一 200 200 混匀,,置于室温(25℃)静置 10min600nm 处测定吸光值 A 5~15min 完成比色),A= A 测定管-A 空白管。 【注】:1.确保蛋白浓度在 0~100µg/ml 范围内,否则需要做相应稀释,即最好使 A 测定的值低于 1.2;稀 释倍数 D 带入公式计算。 2.去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和 0.1mol/L NaOH 溶液对该实验会有影响。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 3.8457x + 0.0136x 是标准品浓度(mg/mL),y A2、蛋白含量 (mg/g 鲜重)=[(A-0.0136)÷3.8457×V1]÷(W×V1÷V)×D =0.26×(A-0.0136)×D÷W 3、蛋白含量(mg/mL)= [(A-0.0136)÷3.8457×V1]÷V1×D=0.26×(A-0.0136)×D V---提取液体积:1mLV1---加入粗提液体积:0.04mLW---样本质量:gD---稀释倍数,未稀释即为 1附:标准曲线制作过程: 1 标准品母液(0.5mg/mL)。 2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

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