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土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-23

简要描述:

土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒,微板法
半纤维素酶主要检测木聚糖酶活力,是将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称,广泛应用于酿造和饲料工业中。

土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒,微板法

土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒说明书 (货号:WS6230W 微板法 48 样) 一、产品简介: 半纤维素酶主要检测木聚糖酶活力,是将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总 称,广泛应用于酿造和饲料工业中。 土壤半纤维素酶在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,进一步在沸水浴 条件下与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的 深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,即可 计算该酶活力大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 100mL×1 4℃保存 试剂二 液体 15mL×1 4℃保存 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 标准品 粉剂×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、常温离心机、空气浴(恒温震荡仪)、水浴锅。 四、土壤半纤维素酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min,调节波长至 540nm② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.3 0.3 试剂一 600 900 试剂二 300 充分混匀,40℃培养 6 小时(振荡培养或间隔一段时间手动振荡 混匀几下),12000rpm25℃离心 10min,上清液待用 ③ 显色反应,在 EP 管中依次加入: 上清液 40 40 试剂三 200 200 混匀,沸水浴(95-100℃,可用封口膜缠紧,防止水分流失)5min 后,冷却至室温。 蒸馏水 800 800 混匀,若浑浊则 8000rpm 室温离心 5min,取 200μL 液体至 96 孔板中,于 540nm 处读取吸光值 AA=A 测定管-A 空白管。 【注】:1.ΔA 较小,可延长 40的孵育时间 T(如 24 小时或更长),或增加土样质量 W或增加歩显色反应步骤中的上清液 V1(如由 40μL 增至 240μL 或更多,则蒸馏 水相应减少)。则改变后的 T W V1 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 2.若测定管 A 值大于 1.5 A 大于 1歩显色反应步骤中的上清液可用蒸馏水稀释, 则稀释倍数 D 代入公式计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y=7.5568x+0.0007x 是标准品质量(mg),y 是△A2、酶活定义:PH4.8 条件下,每克土壤每天分解木聚糖产生 1mg 还原糖所需的酶量为 一个酶活单位。 土壤半纤维素酶活力(mg/d/g 土样)=[(A-0.0007)÷7.5568]×(V2÷V1)÷W÷T×D =12×(A-0.0007)÷W×D V1---显色反应中上清液体积,40μL=0.04mLV2---反应总体积,900μL=0.9mLT---反应时间,1/4dW---土壤样本质量,gD---稀释倍数,未稀释即为 1附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(5mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水(母液需在两天 内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 在显色反应阶段,按照测定管加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。

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