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土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-23

简要描述:

土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性试剂盒,微板法
土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa,EC 3.2.1.55)是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类。

土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性试剂盒,微板法

土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性测定试剂盒说明书 (货号:WS5430W 微板法 48 ) 一、产品简介: 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-AfaEC 3.2.1.55)是一种能够水解非还原呋喃阿拉 伯糖残基的糖苷酶类。 本试剂盒提供一种简单,灵敏,快速的测定方法,S-α-Afa分解对-硝基苯阿拉伯呋喃 糖苷生成对-硝基*酚(PNP),后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率即 可得出α-Afa酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 40mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部,再 15.5mL 试剂一,充分溶解备用。 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、蒸馏水。 四、土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样或者 37 度烘箱风干(需先粗研磨),过 40 目筛网,备用。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 405 nm② 在离心管中依次加入下列试剂: 【注】:1. A 测定超过 1.8,可对最后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释(用水稀释即 可),稀释倍数 D 代入计算公式; 2.ΔA 过小,可以增加土样量或延长保温时间(如:2h 或更长),重新调整的样本量 W 和反应 时间 T 需代入计算公式重新计算。 3. 若同时检测同一背景下的土壤样本,此批土壤样本可做一个样本自身对照,节省时间;若是不 试剂名称(μL测定管 对照管 土壤(g0.1g 0.1g 试剂一 300 试剂二 300 迅速混匀,37℃保温 1h(间隔 15min 振荡混匀一次) 试剂三 200 200 混匀,12000rpm,离心 5min立即取上清液 200μL 96 孔板中,立即405nm 下读取吸光值 AA= A 测定- A 对照(每个样本需做一个自身对照)。本试剂盒仅供科研使用 2 同背景下的土壤样本(如黑土,红土,黄土等),则每个样本需做一个自身对照,即按照说 明书加样表操作即可, 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.1292x - 0.0128x 是标准品 PNP 质量(μg), y A2、活性定义:在 37℃,每小时每克土壤产生 1μg -硝基*酚(PNP)定义为 1 个酶活单位。 S-α-Afa(μg/h/g 土样)=[(A+0.0128)÷0.1292]÷W÷T×D=7.74×(A+0.0128)÷W×D W---土壤样品质量,gD---稀释倍数,未稀释即为 1T---催化反应时间,1 hPNP 相对分子质量---139.11附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水溶解,若有结晶 析出,需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 EP 管中直接加入:10μL 标准品+290μL 试剂一+200μL 试剂三,混匀,立即取上 清液 200μL 96 孔板中,立即于 405nm 下读取吸光值 A4 根据结果制作标准曲线。

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