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淀粉磷酸化酶试剂盒

更新时间:2024-05-22

简要描述:

淀粉磷酸化酶试剂盒
淀粉磷酸化酶是植物组织中降解淀粉的关键酶之一, 采用无机磷比色法测定淀粉磷酸化酶活性。

淀粉磷酸化酶试剂盒

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本试剂盒仅供科研使用 1 淀粉磷酸化酶活性测定说明书 (货号:WS0750F 分光法 24 样) 一、产品简介: 淀粉磷酸化酶是植物组织中降解淀粉的关键酶之一, 采用无机磷比色法测定淀粉 磷酸化酶活性。 二、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 研钵、冰和蒸馏水。 三、试剂盒的组成和配制: 【注】:全程操作需无磷环境;试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等,也可以用一次性塑料器皿,避 免磷污染。 四、淀粉磷酸化酶活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4×12000rpm 离心 10min,取 上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 700nm,所有试剂解冻至室温(25℃)。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 提取液 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩下使粉体落入底部,再加 12mL 提取液后于 80℃水浴溶解 试剂二 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩下使粉体落入底部,再加 12mL 蒸馏水溶解 试剂三 液体 10mL×1 4℃保存 试剂四 A:粉体 mg×1 B:液体 3mL×1 4℃保存 临用前加 2.9mL B 液,再加 37.1mL 的蒸馏水,混匀溶解备用。 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 试剂名称(μL测定管 对照管 试剂一 200 200 样本 150 试剂二 200 200 混匀,37℃孵育 20min 试剂三 200 200 样本 150 混匀,12000rpm4℃离心 5min,上清液待测本试剂盒仅供科研使用 2 ③ 显色反应: 上清液 150 150 试剂四 600 600 混匀,室温静置 3min700nm 下读取各管吸光值, A=A 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照)。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.8474x - 0.0164x 是标准品摩尔质量(μmol/mL, y 是△A2、按蛋白浓度计算: 定义:每小时每毫克组织蛋白分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。 酶活力(μmol/h/mg prot)= [(A+0.0164)÷0.8474×V2] ÷V1×Cpr÷T =17.7×(A+0.0164)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 定义:每小时每克组织分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。 酶活力(μmol/h/g 鲜重)= [(A+0.0164)÷0.8474×V2]÷(W× V1÷V)÷T =17.7×(A+0.0164)÷W V---加入提取液体积,1mLV1---加入样本体积,0.15mL V2---酶促反应总体积,0.75mLT---反应时间,1/3 小时; W---样本鲜重,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(5μmol/mL):标准品用 10mL 试剂一溶解。(母液需在两天内用)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根据实际样本来调整 标准品浓度。 3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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