产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 微板法 > 蔗糖磷酸合成酶(SPS)试剂盒,微板法

蔗糖磷酸合成酶(SPS)试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-22

简要描述:

蔗糖磷酸合成酶(SPS)试剂盒,微板法
蔗糖磷酸合成酶(EC 2.4.1.14)主要存在细胞质内,参与植物的生长发育,是植物体内催化蔗糖合成的关键酶之一。

蔗糖磷酸合成酶(SPS)试剂盒,微板法

蔗糖磷酸合成酶(SPS)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthaseSPS)试剂盒说明书 (货号:WS5150F 分光法 24 样) 一、产品简介: 蔗糖磷酸合成酶(EC 2.4.1.14)主要存在细胞质内,参与植物的生长发育,是植物体 内催化蔗糖合成的关键酶之一。蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖 磷酸与间苯*fen反应生成有色物质,在 480nm 下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的 深浅成正比。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 液体 2.1mL×1 -20℃保存 试剂二 液体 1mL×1 4℃保存 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 试剂四 粉剂 mg×2 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部, 每瓶加入 4mL 蒸馏水充分溶解, 现配现用,一周内用完。 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、离心机、可调式移液器、研 钵、蒸馏水。 四、蔗糖磷酸合成酶(SPS)的测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称样本 0.1g(水分充足的样本可取 0.5g)于研钵中,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆。 12000rpm4℃离心 10min,取上清液,置冰上待测。 【注意】 若样本含糖量高,可引起 A 对照值较大如超过 1.6,即检测背景值过高会影响检测,可在样本 制备过程中增加除糖步骤:取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 经预冷的 95%乙醇 冰浴匀浆,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 5min;弃上清,留沉淀,向沉淀中加入经预冷的 80% 乙醇混匀,4℃放置 5min12000rpm4℃离心 5min;弃上清,留沉淀。再向沉淀中加入 1mL 经预冷 提取液涡旋混匀,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 10min;留上清,弃沉淀。上清液置冰上待测。 ② 液体样本:直接测定。 若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 试剂一 80 蒸馏水 80 样本 40 40 37℃水浴 20min 试剂二 20 20本试剂盒仅供科研使用 2 试剂二需直接加到反应液里面,且务必混匀(可用枪头吸打),95℃浴中煮沸 10min(可用封口膜缠紧,防止水分散失),冷却至室温。 试剂三 400 400 试剂四 120 120 混匀,95℃水浴 20min,冷却后液体全部转入 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,480nm 下读取吸光值 AΔA=A 测定-A 对照(每个测定管 需设一个对照管)。 【注】:若ΔA 值过小如在零附近徘徊,可延长 37℃水浴时间 T(如 40min 或更长)或增加样本取样 W(如增至 0.2g),或者增加样本的加样体积 V1(如 80μL,则试剂三相应减少),相应的 变量重新代入计算公式计算。 五、计算公式: 1、标准曲线方程:y = 0.0042x - 0.0016x 是标准品质量(μg),y ΔA2、按照蛋白浓度计算: 单位定义:每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 SPS 活性(μg /min/mg prot)=[(ΔA+0.0016) ÷0.0042]÷(V1×Cpr)÷T =297.6×(ΔA+0.0016)÷Cpr 3、按照样本鲜重计算: 单位定义:每克组织每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 SPS 活性(μg /min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0016) ÷0.0042]÷(V1÷V×W)÷T =297.6×(ΔA+0.0016)÷W 4、按照液体体积计算: 单位定义:每毫升液体每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 SPS 活性(μg /min/mL)=[(ΔA+0.0016) ÷0.0042]÷V1÷T =297.6×(ΔA+0.0016) V---加入提取液体积,1mLV1---加入反应体系中样本体积,0.04mLW---样本鲜重,gT ---反应时间:20minCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水(母液需在两天 内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8. mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 按照:40μL 标准品+80μL 蒸馏水+20μL 试剂二+400μL 试剂三+120μL 试剂四,依次 加样操作,95℃水浴 20min,冷却后液体转入 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,480nm 下测定,根据结果即可制作标准曲线。

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
上海宇淳生物科技有限公司

上海宇淳生物科技有限公司

地址:上海市南航公路1981弄72号

版权所有:上海宇淳生物科技有限公司  备案号:沪ICP备19012414号-1  总访问量:180835  站点地图  技术支持:环保在线  管理登陆