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β-1,3-1,4-葡聚糖酶活测定试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-21

简要描述:

β-1,3-1,4-葡聚糖酶活测定试剂盒,微板法
β-1,3-1,4-葡聚糖酶(又称地衣多糖酶;EC 3.2.1.73)是一类重要的水解酶,可以水解谷物
中的β-1,3-1,4-葡聚糖,其在食品、饲料和纺织等领域的具有重要应用价值。

β-1,3-1,4-葡聚糖酶活测定试剂盒,微板法

β-1,3-1,4-葡聚糖酶活测定试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶(β-1,3-1,4-glucanase)酶活试剂盒说明书 (货号:WS4750W 微板法 96 样) 一、产品简介: β-1,3-1,4-葡聚糖酶(又称地衣多糖酶;EC 3.2.1.73)是一类重要的水解酶,可以水解谷物 中的β-1,3-1,4-葡聚糖,其在食品、饲料和纺织等领域的具有重要应用价值。 β-1,3-1,4-葡聚糖酶水解底物葡聚糖产生还原性糖。利用 3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的 量,在 540nm 读取吸光值,进而得出β-1,3-1,4-葡聚糖酶的活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 120mL×1 4℃保存 试剂一 液体 30mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底 部,再加 1.1mL 蒸馏水,80℃ 水浴 10min 充分溶解,冷却至 室温待用。 试剂三 液体 30mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、β-1,3-1,4-葡聚糖酶(β-1,3-1,4-GA)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g)到研钵内,加入 1mL 提取液,在冰上进 行冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 [:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取。 ② 细菌/真菌样本: 先收集细菌/真菌到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌/真菌加入 1mL 提取液; 冰浴超声波破碎细菌/真菌(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 :也可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:若是澄清液体,直接检测,若液体样本浑浊,需 4℃×12000rpm,离心 10min取上清液检测。 2、上机检测① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm② 所有试剂解冻至室温(25℃),在 EP 管中依次加入试剂名称(μL测定管 对照管 样本 50 50 试剂一 140 150 试剂二 10 混匀,37℃孵育 30min 试剂三 150 150本试剂盒仅供科研使用 2 混匀,95℃水浴 5min,取出后用自来水或冰水冷却至室温, 200μL 澄清液体于 96 孔板中,在 540nm 处读取吸光值 AΔA=A 测定管-A 对照管(每个样本做一个对照管)。 【注】:ΔA 在零附近徘徊,可在样本制备时加大取样质量 W(如增至 0.5g,或在上机检测 时加大上样量 V1(由 50μL 增加到 100μL,则试剂一相应减少,保持总体积不变), 或延长反应时间 T(如增至 60min,则改变后的 WV1 T 需带入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.0123x - 0.035x 为标准品浓度(μg),y ΔA2、按蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-1,4-GA(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(V1×Cpr) ÷T =54.2×(ΔA+0.035)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织样本每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-1,4-GA(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(W×V1÷V) ÷T =54.2×(ΔA+0.035)÷W 4、按细菌/真菌数量计算: 酶活定义:每 1 万个细菌或真菌每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义一个酶活性单位。 β-1,3-1,4-GA(μg/min /104 cell)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(500×V1÷V) ÷T=0.11×(ΔA+0.035) 5、按液体体积计算: 酶活定义:每毫升液体中每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义一个酶活性单位。 β-1,3-1,4-GA(μg/min/mL)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷V1÷T=54.2×(ΔA+0.035) V---提取液体积,1mLV1---样本上样体积,50μL =0.05mLT---反应时间,30minW---样本鲜重,g500---细菌/真菌总数,500 万; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据 50μL 标准品+150μL 试剂一+150μL 试剂三,混匀 95℃水浴 5min,取出后用自 来水或冰水冷却至室温,取 200μL 澄清液体于 96 孔板中,在 540nm 处读取吸光值 A,根据结果即可制作标准曲线。

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