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普鲁兰酶活性测定试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-21

简要描述:

普鲁兰酶活性测定试剂盒,微板法
普鲁兰酶是一种水解酶,广泛存在于微生物及动物、植物体内,能专一地分解淀粉和
糖原及其衍生物分枝点的α-1.6-葡萄糖昔键。它的这种特性最早被用于淀粉结构的理论
研究,到七十年代,普鲁兰酶的应用已扩展到淀粉糖浆、啤酒和酒精生产等多个淀粉深加
工领域,并逐步从实验室阶段走向工业化规模。

普鲁兰酶活性测定试剂盒,微板法

普鲁兰酶活性测定试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 普鲁兰酶活性测定试剂盒说明书 (货号:WS8750W 微板法 96 样) 一、产品简介: 普鲁兰酶是一种水解酶,广泛存在于微生物及动物、植物体内,能专一地分解淀粉和 糖原及其衍生物分枝点的α-1.6-葡萄糖昔键。它的这种特性最早被用于淀粉结构的理论 研究,到七十年代,普鲁兰酶的应用已扩展到淀粉糖浆、啤酒和酒精生产等多个淀粉深加 工领域,并逐步从实验室阶段走向工业化规模。 普鲁兰酶催化普鲁兰分解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色 氨基化合物,经光谱扫描在 540nm 有特征光吸收,在一定范围内 540nm 光吸收值与还 原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算普鲁兰酶活性大小。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 液体 30mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂×1 4℃保存 用前甩几下使粉剂落入底部,再 加入 22mL 试剂一充分溶解备 用;用不完的试剂 4保存; 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、普鲁兰酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称样本 0.1g(水分充足的样本可取 0.5g)于研钵中,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆后 转入离心管中。12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 液体样本:直接测定。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: 1 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 20 20 95℃煮沸 10min 的酶液) 试剂二 100 100 混匀,50℃孵育 30min 试剂三 100 100 混匀,95℃水浴 10min(用封口膜缠紧,以防止水分散失),流 水冷却至室温。 蒸馏水 500 500 混匀,取出 200μL 96 孔板中,于 540nm 处读取吸光值 AΔAA 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照)。本试剂盒仅供科研使用 2 【注】:1.A 测定管的吸光值大于 2,可以用蒸馏水对整个显色混合液用蒸馏水进行稀释(如取 显色混合液 100μL 96 孔板中,再加 100μL 蒸馏水,即稀释 2 倍),则稀释倍数 D 代入公式计算。或减少上清液体积 V1(如减至 10μL,则加 10μL 蒸馏水补齐),则 V1 需代入公式重新计算。 2.若ΔA 值在零附近徘徊,可增加样本加样体积 V1(如增至 40μL,则最后蒸馏水体积相 应减少,保持反应总体积不变),或延长 50℃孵育时间 T(如增至 60min),则相应的 V1 和反应时间 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程为 y = 8.154x - 0.0438x 为标准品质量(mg),y ΔA2、按蛋白浓度计算: 单位定义:37℃每毫克蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。 普鲁兰酶活性(μg/min /mg prot=[(ΔA+0.0438)÷8.154×103]÷(V1×Cpr )÷T =204.4×(ΔA+0.0438)÷Cpr 3、按鲜重计算: 单位定义:37℃每克组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。 普鲁兰酶活性(μg/min /g 鲜重)=[(ΔA+0.0438)÷8.154×103]÷(W×V1÷V2)÷T =204.4×(ΔA+0.0438)÷W 4、按液体样本计算: 单位定义:37℃每毫升液体样本每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。 普鲁兰酶活性(μg/min /mL 液体)=[(ΔA+0.0438)÷8.154×103]÷W×V1÷T =204.4×(ΔA+0.0438) V---加入提取液体积,1mLV1---加入反应体系中样本体积,0.02mLT---反应时间,30minW---样本鲜重,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的蛋白含量(考马斯亮蓝法)试剂盒,不 建议使用蛋白含量(BCA ) 试剂盒; 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(5mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水(母液需在两天 内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 按照:20μL 标准品+100μL 蒸馏水+100μL 试剂三,95℃水浴 10min,冷却后,再加 500μL 蒸馏水,混匀,取 200μL 96 孔板中,540nm 下测定,根据结果即可制作 标准曲线。

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