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漆酶(Lac)活性试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-20

简要描述:

漆酶(Lac)活性试剂盒,微板法
漆酶(EC 1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,广泛分布于真菌
和高等植物中,具有较强的氧化还原能力,在纸浆生物漂白,环境污染物降解和木质纤维
素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。

漆酶(Lac)活性试剂盒,微板法

漆酶(Lac)活性试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用

 漆酶(Laccase)试剂盒说明书 

(货号:WS1450W 微板法 96 样) 

一、产品简介: 漆酶(EC 1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,广泛分布于真菌 和高等植物中,具有较强的氧化还原能力,在纸浆生物漂白,环境污染物降解和木质纤维 素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。 漆酶分解底物 ABTS 产生 ABTS 自由基,在 420nm 处的吸光系数远大于底物 ABTS测定 ABTS 自由基的增加速率,可计算得漆酶活性。 二、试剂盒组分与配制 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 液体 12mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂×1 4℃保存 临用前甩几下,使粉剂落到底部, 再加 5.5mL 蒸馏水充分溶解,4保存一周,若变色则不能使用。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、恒温水浴锅。 四、漆酶活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备 ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 10min,取 上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细胞加入 1mL 提取液,冰 浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);12000rpm4离心 10min,取上清置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 420nm② 在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 30 试剂一 120 试剂二 50 25℃,立即于 420nm 处读取吸光值 A1反应 5min 后读取 A2A=A2-A1若△A 差值较小,可增加样本量 V1(如由 30μL 增至 60μL,则试剂一相应减少) 或延长反应时间 T(如由 5min 增至 15min),则改变后的样本体积 V1 和反应 时间 T 则代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1.按照蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶活性(nmol/min/mg prot)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=74.07×A÷Cpr 2.按照样本质量计算: 酶活定义:每克样品每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶活性(nmol/min/g 鲜重)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=74.07×A÷W 3.按照细胞数量计算: 酶活定义:每 104个细胞每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶活性(nmol/min/104 cell)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(细胞数量×V1÷V)÷T =74.07×细胞数量 4.按照液体体积计算: 酶活定义:每毫升液体每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶活性(nmol/min/mL)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=74.07×A ε---ABTS 摩尔消光系数:36×103L/mol/cmd---96 孔板光径,0.5cmV2---反应总体积,0.2mL=2×10-4LV1---反应中样本体积,0.03mLV---加入提取液体积,1mLW---样本质量,gT---反应时间,5minCpr:样本蛋白浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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