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离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒

更新时间:2024-06-19

简要描述:

离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒
果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸等 形式广泛分布于植物果实、根茎和叶中。

离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒说明书 (货号:WS5070F 分光法 48 样) 一、产品简介: 果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸等 形式广泛分布于植物果实、根茎和叶中。果胶间以 Ca2+Mg2+、氢键、糖苷键、酯键等 方式与其他物质交联,通过特异的提取方式可以提取得到离子结合型果胶(ISP)和共价 结合果胶(CSP)。 本试剂盒用带有螯合剂的酸溶液特异提取离子结合型果胶(ISP),采用硫酸-咔唑比色 法测定果胶含量。果胶水解为半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应,生成紫红 色物质,经光谱扫描该物质在 530nm 处有最大吸收峰,颜色深浅与果胶含量成正比,进 而得离子结合型果胶含量。 二、测试盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 A 液体 60 mL×1 4℃保存 提取液 B 液体 60 mL×1 4℃保存 试剂一 液体 1.5mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、可调式移液器、乙醇硫酸、研钵。 四、离子结合型果胶(ISP)含量测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 取 0.1g 组织(烘干且过筛后的粉末组织可取 0.02g),加 1.5mL 80%乙醇,研磨匀 浆,85℃水浴 10min,取出流水冷却后,8000rpm25℃10min,弃上清,留沉淀(尽 量保留沉淀)。 ② 向沉淀中加入 1mL 80%乙醇震荡混匀 2min85℃水浴 10min,取出流水冷却后, 8000rpm25℃10min,弃上清,留沉淀(尽量保留沉淀)。 ③ 加入 1mL 的提取液 A90℃水浴 15min(间隔 3min 晃动一次),8000rpm,室温(25℃离心 10min,弃上清,留沉淀,向沉淀中加入 1mL 丙酮振荡混匀,8000rpm,室温 25℃)离心 10min,弃上清,留沉淀,(注:若色素仍很多,继续用丙酮提取 1-2 ), 打开 EP 管置于 90℃孵育 20min,使沉淀干燥。 ④ 向沉淀中加入 1mL 提取液 B,室温(25℃)震荡提取 1 小时后,8000rpm25℃离 10min,上清液待测。 2、上机检测: ① 分光光度计预热 30min 以上,调节波长为 530nm,蒸馏水调零。 ② 可取两个样本做适当梯度的稀释(如 4 倍,即 1 份上清液+3 份蒸馏水),确定 适合本次实验的稀释倍数 D③ 在 EP 管中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称 µL测定管 空白管 (仅做一次) 样本 105 蒸馏水 105 浓硫酸 630 630 可用封口膜缠紧,85℃水浴 15min 后, 流水冷却至室温。 试剂一 21 21 混匀,室温(25℃)暗处反应 30min(间隔 10min 混匀一次),全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中, 530nm 处读取吸光值 AA=A 测定-A 空白。 【注】:1、浓硫酸必须是分析纯级别,且不能长期开口放置,否则影响显色结果。另外浓硫酸具有 强腐蚀性,操作时需特别注意,85℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。 2、显色反应必须在暗处反应,否则颜色很快消失或者变淡,影响吸光值。 3、若 A 测定管值大于 1.8,可用蒸馏水稀释样本即待检测上清液,则稀释倍数 D 需代入公 式计算;或若 A 值再零附近可增加样本取样质量 W五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 2.6619x-0.0141;,x 为标准品浓度(mg/mL),y A2、离子结合型果胶(mg /g 重量) =[(ΔA+0.0141) ÷2.6619×V1]÷ (W×V1÷V)×D =0.37×(ΔA+0.0141)÷W W---样本重量,gV---加入提取液体积,1mLV1---加入样本体积,0.105mLD---稀释倍数。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(0.5mg/mL):临用前向标准品中加入 2mL 蒸馏水(现配现用)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:00.10.20.30.40.5. mg/mL也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

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