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植物果糖-1,6-二磷酸(酯)酶(FBP)试剂盒

更新时间:2024-06-17

简要描述:

植物果糖-1,6-二磷酸(酯)酶(FBP)试剂盒
果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖 1,6 二磷酸酯酶(FBP,EC 3.1.3.11),有两种 FBPase 存在于 光合细胞中。

植物果糖-1,6-二磷酸(酯)酶(FBP)试剂盒

植物果糖-1,6-二磷酸(酯)酶(FBP)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 植物果糖-1,6-二磷酸(酯)酶(Fructose 1,6-bisphosphataseFBP) 试剂盒说明书 (货号:WS5060F 紫外分光法 48 样) 一、产品简介: 果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖 1,6 二磷酸酯酶(FBPEC 3.1.3.11),有两种 FBPase 存在于 光合细胞中。胞质型 FBP 主要存在于细胞质,参与蔗糖合成和糖异生途径;叶绿体型 FBP 存在于叶绿体中,它在二氧化碳同化途径中发挥调节作用。 FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和无机磷,接着与酶促复合物相互作用, 伴随着 NADPH 的生成,通过检测 NADPH 340nm 处的增加速率,进而计算出 FBP 酶活 性大小。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液一 液体 60mL×1 4℃保存 提取液二 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下或离心使试剂落入底 部,再加 2.1mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 粉剂 mg×1 -20℃保存 用前甩几下或离心使试剂落入底 部,再加 2.1mL 蒸馏水溶解备用。 试剂三 液体 30mL×1 4℃保存 试剂四 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下或离心使试剂落入底 部,再加 4.2mL 蒸馏水溶解备用。 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、恒温水浴锅、台式离心机、可调式 移液器、研钵和蒸馏水。 四、果糖-1,6-二磷酸(酯)酶(FBP)活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备: FBP酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液二进行冰浴匀浆,于4℃,13000rpm 离心5min,取上清液测定。 胞浆和叶绿体 FBP 酶的分离: 称取约0.2g样本,加入1mL提取液一,快速冰浴匀浆后于4℃,1600rpm离心5min,弃 沉淀,取上清再4℃,5000rpm离心15min取上清用于测定胞浆FBP酶活性,取沉淀加1mL 提取液二,强力涡旋震荡15s,置于冰上(或冰箱)孵育15min,在4℃,13000rpm离心5min取上清测定叶绿体中FBP酶活性。提示:整个叶绿体的提取过程须保持4低温环境。 建议测定总 FBP 酶活性,按照步骤提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 FBP,则按照步骤提取粗酶液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 2上机检测: ① 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,设置温度 25℃,蒸馏水调零。 ② 试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称(μL测定管 样本 40 试剂一 40 试剂二 40 试剂三 500 轻轻混匀,室温(25℃)孵育 10min 试剂四 80 混匀,于 340nm 处测定,1min 时读取 A110min 后读取 A2ΔA=A2-A1【注】若ΔA 在零附近徘徊,可以延长至 20min 后重新读取 A2,或则增加样本量 V1(如增 80μL,则试剂三相应减少),则改变后的反应时间 T 或样本量 V1 需重新代入计 算公司计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。 FBP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr) ÷T =281.4×ΔA÷Cpr 2、按照样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 FBP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T =281.4×ΔA÷W V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.04mLV2---反应体系总体积,7×10-4 Ld---光径,1cmε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmW---样本质量,gT---反应时间,10minCpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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