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叶绿体色素(叶绿素ab和类胡萝卜素)试剂盒

更新时间:2024-06-14

简要描述:

叶绿体色素(叶绿素ab和类胡萝卜素)试剂盒
叶绿体中所含色素主要有两大类,叶绿素(包括叶绿素 a 和叶绿素 b)和类胡萝卜素(包 括胡萝卜素和叶黄素),它们与类囊体膜上的蛋白质结合

叶绿体色素(叶绿素ab和类胡萝卜素)试剂盒

叶绿体色素(叶绿素ab和类胡萝卜素)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 叶绿体色素含量测定试剂盒说明书 (货号:WS3160W 微板法 96 ) 一、产品简介: 叶绿体中所含色素主要有两大类,叶绿素(包括叶绿素 a 和叶绿素 b)和类胡萝卜素(括胡萝卜素和叶黄素),它们与类囊体膜上的蛋白质结合,成为色素蛋白复合体,其含量 多少及其组成决定了植物对不同光的吸收、利用效率,常常作为研究光合生理的重要指标。 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,在 649nm 665nm 处测定叶绿素提取物的 吸光值,在 470nm 处测定类胡萝卜素;然后利用经验公式计算出样品中叶绿素 a 含量、 叶绿素 b 含量、叶绿素总含量及类胡萝卜素含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 试剂一 粉剂×1 4℃保存 乙醇(自备) 1000mL×1 4℃保存 抽提 Buffer 配制:(体积比)乙醇:蒸馏水=95:5 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、天平、10mL 玻璃试管、锡箔纸、无水乙醇。 四、叶绿体色素含量的测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备 1)取新鲜植物叶片或其它绿色组织,去掉中脉。 2)称约 0.1g 剪碎,用蒸馏水洗干净,然后加入 1mL 抽提 Buffer,少量试剂一(约 50mg), 叶绿素对光敏感,务必在黑暗或弱光条件下充分研磨(难磨叶片可以添加少量石英砂助 磨),然后转移至 10mL 玻璃试管。 3)用抽提 Buffer 冲洗研钵,将所有冲洗液及研钵中所有的绿色物质转入 10mL 玻璃试管, 用抽提 Buffer 补充至 10mL,玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提 3h,观察试 管底部组织残渣*全变白则提取*全,若组织残渣未*全变白,继续浸提至其*全变白。 2、上机检测 分别取200μL浸提液和200μL抽提Buffer96孔板,记为测定管和空白管,分别于665nm 649nm 470nm 处读取吸光值 A,△A 665=(A 测定-A 空白) 665,△A 649=(A 测定-A 空白) 649,△A 470=(A 测定-A 空白) 470【注】:若吸光值 A 超过 1,待检测的浸提液用抽提 buffer 稀释,计算公式乘以稀释倍数。 五、结果计算: 叶绿素 a 含量(mg/g 鲜重)=Ca× D W V 1000   叶绿素 b 含量(mg/g 鲜重)=Cb× D W V 1000   叶绿素总含量(mg/g 鲜重)=CT× D W V 1000   类胡萝卜素含量(mg/g 鲜重)=Cc× D W V 1000  本试剂盒仅供科研使用 Ca=13.95×A6656.88×A649 (mg/L)Cb=24.96×A6497.32×A665(mg/L)CT=6.63×A665+18.08×A649(mg/L)Cc=(1000×A470-2.05×Ca-114.8×Cb)÷245(mg/L) =(1000×A470-2851.304×A649+811.7385×A665)÷245 (mg/L)V---代表提取液体积,10mLD---代表稀释倍数,未稀释即为 1W---代表样本质量,g2

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