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葡萄糖氧化酶(GOD)活性测定试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-14

简要描述:

葡萄糖氧化酶(GOD)活性测定试剂盒,微板法
葡萄糖氧化酶(GOD,EC 1.1.3.4)是一种常见于多种微生物中的氧化还原酶,葡萄糖 氧化酶催化葡萄糖和氧反应生成葡萄糖酸和过氧化氢

葡萄糖氧化酶(GOD)活性测定试剂盒,微板法

葡萄糖氧化酶(GOD)活性测定试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 葡萄糖氧化酶(GOD)活性测定试剂盒说明书 (货号:WS1950W 微板法 96 样) 一、产品简介: 葡萄糖氧化酶(GODEC 1.1.3.4)是一种常见于多种微生物中的氧化还原酶,葡萄糖 氧化酶催化葡萄糖和氧反应生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢和特异显色剂反应产生 (粉)红色产物,该产物在510nm有最大吸收峰,进而得到葡萄糖氧化酶酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 液体 6mL×1 4℃保存 试剂二 液体 10mL×1 4℃保存 试剂三 粉体 mg×2 4℃保存 用前甩几下使粉体落入底部,每支 1.2mL 的蒸馏水溶解备用。 标准管 液体 mL×1 4℃保存 三、所需仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、天平、移液器、研钵、离心机、蒸馏水。 四、葡萄糖氧化酶(GOD)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 0.1g 组织样本(水分充足的样本建议取 0.2g 左右),加 1mL 的蒸馏水研磨,粗提液 全部转移到 EP 管中,12000rpm4℃离心 10min,上清液待测。 ② 细胞/细菌样本: 先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细胞/细菌加入 1mL 蒸馏水或 PBS 或生理盐水,超声波破碎细胞/细菌(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 2、上机检测: 1 酶标仪预热 30min,设定波长到 510nm2 所有室温至室温(25℃)。在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 试剂一 60 试剂二 100 样本 20 混匀,37℃孵育 5min 试剂三 20 混匀,于 510nm 下读取吸光值 A137℃孵育 20min 后读取吸光值 A2A =A2-A1【注】:若A 值在零附近,则增加样本加样体积 V1(如增至 50μL,则试剂一相应减少), 或延长反应时间 T(如延长至 40min 60min),则改变后的 V1 T 需代入公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 11.151x - 0.0212x H2O2标准品(μmoL)y ΔA2按样本鲜重计算: 单位定义:在 37℃,每克组织每小时生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位(U)。 GOD (μmoL/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0212)÷11.151]÷(W×V1÷V)÷T =13.45×(ΔA+0.0212)÷W 3、按样本蛋白浓度计算: 单位定义:在 37℃,每毫克组织蛋白每小时生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位(U)。 GOD (μmoL/h/mg prot)=[(ΔA+0.0212)÷11.151]÷(V1×Cpr) ÷T=13.45×(ΔA+0.0212)÷Cpr 4、按细胞/细菌数量计算: 单位定义:在 37℃,每 104个细胞/细菌每小时生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位(U)。 GOD (μmoL/h/104 cell)=[(ΔA+0.0212)÷11.151]÷(500×V1÷V)÷T=0.027×(A+0.0212) V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.02mLT---反应时间,20min=1/3hW---样本质量,g500---细胞数量,万; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(250μmol/mL)。 2 把母液稀释成以下浓度:00.511.522.5μmol/mL。也可根据实际调整浓度。 3 96 孔板中直接加入:20μL 标准品+80μL 试剂一+100μL 试剂二,混匀于 510nm 读值,依据结果即可制作标准曲线。

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