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6-磷酸山li醇脱氢酶活性试剂盒

更新时间:2024-06-14

简要描述:

6-磷酸山li醇脱氢酶活性试剂盒
6-磷酸山*醇脱氢酶(S6PDH,EC 1.1.1.200)又称醛糖 6-磷酸还原酶(Aldose-6-phos -phate reductase,A6PR),催化 D-山梨糖醇 6-磷酸和 D-葡萄糖 6-磷酸之间的相互转化。

6-磷酸山li醇脱氢酶活性试剂盒

6-磷酸山li醇脱氢酶活性试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 6-磷酸山*醇脱氢酶(Sorbitol-6-phosphate dehydrogenase)活性试剂盒说明书 (货号:WS5750F 紫外法 48 样) 一、产品简介: 6-磷酸山*醇脱氢酶(S6PDHEC 1.1.1.200)又称醛糖 6-磷酸还原酶(Aldose-6-phos -phate reductaseA6PR),催化 D-山梨糖醇 6-磷酸和 D-葡萄糖 6-磷酸之间的相互转化。研 究发现该酶在苹果叶片等蔷薇科植物中广泛分布,其在山*醇合成中起着重要作用。 6-磷酸山*醇脱氢酶(S6PDH)催化 D-葡萄糖 6-磷酸还原,并使还原型辅酶NADPH氧化。因此,通过检测 340nm NADPH 的下降速率,即可得出 S6PDH 的酶活性大小。 该酶催化的反应:D-sorbitol 6-phosphate+NADP+=D-glucose 6-phosphate+NADPH+H+ 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×2 4℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部, 每支分别加 0.6mL 蒸馏水溶解备用。 用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止 反复冻融,三天内用完。 试剂二 液体 40mL×1 4℃保存 试剂三 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、 研钵、冰。 四、6-磷酸山*醇脱氢酶(S6PDH)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织样本,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆,12000rpm4℃离心 10min取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 2、上机检测① 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 在 1mL 石英比色皿(光径 1cm)中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 40 试剂一 20 试剂二 680 混匀,室温(25℃)下孵育 10min 试剂三 20 混匀,室温(25℃)下,于 340nm 处读取 A110min 后读取 A2ΔA=A1-A2【注】 1.10s 后反应体系未稳定可延长到 1min 再读值。本试剂盒仅供科研使用 2 2.若△A 在零附近,可适当延长反应时间 T 20min 或更长读取 A2,或适当加大样本量 V1 (如增至 60μL,则试剂二相应减少),则改变后的 T V1 需代入计算公式重新计算。 4. 若起始值 A1 太大如超过 2(如颜色较深的植物叶片,一般色素较高,则起始值相对会偏 高),可以适当减少样本加样量 V1,则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。 或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 12000rpm, 4℃离心 10min,上清液用于检测; 5. ΔA 大于 0.3,需减少反应时间 T(如减至 5min),则改变后的 T 需代入公式重新计算。 6. 若下降趋势不稳定,可以每隔 30S 读取一次吸光值,选取一段线性下降的时间段来参与计 算,相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算 单位定义:每毫克组织蛋白在每分钟内氧化 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 S6PDH 活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr) ÷T =305.5×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算 单位定义:每克组织在每分钟内氧化 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 S6PDH 活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T =305.5×ΔA÷W V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.04mLV2---反应体系总体积,7.6×10-4 Ld---光径,1cmε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmW---样本质量,gT---反应时间,10minCpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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