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总糖含量试剂盒

更新时间:2024-06-13

简要描述:

总糖含量试剂盒
糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总 糖也可称为碳水化合物

总糖含量试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 总糖含量试剂盒说明书 (货号:WS3050F 分光法 48 样) 一、产品简介: 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总 糖也可称为碳水化合物,包括可溶性的单糖,二糖以及不溶性的淀粉,纤维素,几丁质等。 总糖酸水解为还原糖,在碱性条件下,DNS 试剂与还原糖共热后被还原成氨基化合物, 在过量的 NaOH 碱性溶液中呈桔红色,经过 500nm 540nm 波长扫描在 500nm 处有最大 吸收峰,并且在一定的浓度范围内,还原糖含量与 500nm 吸光度成线性关系,根据标准曲 线,以此测定样品中的还原糖含量,即样品中的总糖含量。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 40mL×1 4℃保存 试剂一 空瓶×1 4℃保存 临用前加 15mL 水,再向水中缓 慢加 15mL 的市售盐酸(盐酸有 腐蚀性,加的过程中需缓慢谨慎 加入),混匀备用。 试剂二 液体 30mL×1 4℃保存 试剂三 液体 6mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、可调式移液器、研钵、盐酸四、总糖含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 样品(水分充足的样本可取 0.5g), 750μL 提取液,匀浆后加入 500μL 剂一,封口置于 90℃水浴中加热 30min,并且 15min 振荡一次,用冷水冷却至室温, 加入 500μL 试剂二,用蒸馏水定容至 2mL,混匀,12000rpm25℃离心 10min,取上 清液备用。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 液体样本: 0.1mL 液体样本加入 750μL 提取液,匀浆后加入 500μL 试剂一,封口置于 90℃水浴 30min,并且 15min 振荡一次,用冷水冷却至室温,加入 500μL 试剂二,用蒸馏水定 容至 2mL,混匀,12000 rpm25℃离心 10min,取上清液备用。 2、上机检测① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。 提示:大多数样本总糖含量较高,为使ΔA 值在 1 以内,实验前可选取几个样本做预 测定,用蒸馏水把上清液稀释成不同浓度,找出适合本次检测样本的稀释倍数 D③ 调节水浴锅至 95℃,在 EP 管中依次加入试剂(μL测定管 空白管(仅做一次) 样本 100 蒸馏水 100 试剂三 100 100本试剂盒仅供科研使用 2 混匀,在 95℃水浴中 10min(盖紧封口,以防止水分散失), 取出后立即过冷水冷却至室温。 蒸馏水 1000 1000 混匀,全部液体转移到 1mL 玻璃比色皿中,500nm 读取吸光值 AA=A 测定-A 空白。 【注】:若A 值大于 1.5,样本可用蒸馏水再行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式计算。 五、结果计算: 1、 标准曲线方程为 y =10.217x - 0.0305x 为标准品质量(mg),y A2、按样本鲜重计算: 总糖(mg/g 重量) =[(A+0.0305)÷10.217]÷(W×V1÷V)×D =1.96×(A +0.0305)÷W×D 3、按液体体积计算: 总糖(mg/mL)=[(A+0.0305)÷10.217]÷[V2×V1÷V]×D =19.6×(A +0.0305)×D V---样品提取液总体积,2mLV1---测定时所取样品提取液的体积,0.1mLV2---液体样品量,0.1mLW---样本质量,gD---稀释倍数,未稀释即为 1附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

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