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土壤天冬酰胺酶(S-ASNase)试剂盒

更新时间:2024-06-07

简要描述:

土壤天冬酰胺酶(S-ASNase)试剂盒
天冬酰胺酶(ASNase,EC 3.5.1.1)是酰胺酶的一种,催化天冬酰胺水解成天冬氨酸 和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用。

土壤天冬酰胺酶(S-ASNase)试剂盒

土壤天冬酰胺酶(S-ASNase)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤天冬酰胺酶(solid-asparaginase, S-ASNase) 测定试剂盒说明书 (货号:WS6430F 分光法 48 样) 一、产品简介: 天冬酰胺酶(ASNaseEC 3.5.1.1是酰胺酶的一种,催化天冬酰胺水解成天冬氨酸 和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用。 土壤中的天冬酰胺酶(S-ASNase)催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨,利用氨在强碱 的环境下与次氯酸盐和*酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 40mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×2 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底 部,每瓶再加 6mL 蒸馏水溶解 备用。 试剂三 液体 60mL×1 4℃保存 试剂四 液体 24mL×1 4℃保存 试剂五 液体 12mL×1 4℃保存 试剂六 A:液体 7mL×4 B:液体μL×1 4℃保存 临用前取60μLB液进一瓶A 液中,混匀后作为试剂六使用。 混匀后的试剂六一周内用完。 标准管 液体 mL×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该标曲。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液枪、水浴锅 或恒温培养箱、甲苯和蒸馏水。 四、土壤天冬酰胺酶(S-ASNase)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本的制备: 取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 培养:取 EP 管依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.1 0.1 甲苯 20 20 振荡混匀,室温放置 15min 试剂一 200 200 试剂二 100 混匀,放入 37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 2h 试剂三 300 300 试剂二 100 充分混匀,沸水浴(95℃-100℃10min,室温 12000rpm 离心 10min本试剂盒仅供科研使用 2 上清液待测。 ② 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 630nm,蒸馏水调零。 ③ 显色反应:在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 上清液 60 60 蒸馏水 180 180 试剂四 240 240 试剂五 120 120 试剂六 240 240 充分混匀,37℃放置 20min 后,全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿(光 1cm)中,于 630nm 处读取吸光值 AΔA=A 测定管-A 对照管(每个样本做一个自身对照)。 【注】1. 试剂四和五和六需分开加,不能事先混匀。 2. ΔA 的值较小,可以增加 37℃孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或在显色反应阶段增加上 清液的量 V1(如增至 120μL,则蒸馏水体积相应减少);则改变后的反应时间 T 和上清液体积 V1 需代入计算公式重新计算。 3. A 测定的值大于 1.8,可以减少 37℃孵育时间 T(如减至 1 小时或更短),或在显色反应阶段 减少上清液的量 V1(如减至 30μL,则蒸馏水体积相应增加);则改变后的反应时间 T 和上清液 体积 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程为 y = 1.2921x - 0.0071x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA2、单位定义:每克土样每小时催化天冬酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。 S-ASNase(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.0071) ÷1.2921×(V÷V1)÷W÷T =4×(ΔA+0.0071) ÷W V---反应体系总体积,0.62mLV1---显色反应阶段上清液体积,0.06mLT---反应时间,2hW---土样质量; 附:标准曲线制作过程: 1 标准品母液(10μg/mL 的氨): 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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