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土壤中性磷酸酶(S-NP)试剂盒

更新时间:2024-06-06

简要描述:

土壤中性磷酸酶(S-NP)试剂盒
土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用,是评价土壤磷素生物转化方向和强度 的指标,也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的关系。

土壤中性磷酸酶(S-NP)试剂盒

土壤中性磷酸酶(S-NP)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤中性磷酸酶(S-NP)试剂盒说明书 (货号:WS6030F 分光法 48 ) 一、产品简介: 土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用,是评价土壤磷素生物转化方向和强度 的指标,也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的关系。 本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的检测方法。在中性环境中,土壤中性磷酸酶(S-NP催化磷酸对硝基苯酯(pNPP)生成黄色的产物 PNP,该产物在 405nm 处有最大吸收峰。 通过检测 PNP 405nm 下的增加速率,即可得到土壤中性磷酸酶活性的大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 55mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前加 10mL 试剂一充分溶解, 一周内用完。 试剂三 液体 30mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、 可调式移液器、蒸馏水、甲苯四、土壤中性磷酸酶(S-NP)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。 2、上机检测: ① 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 405 nm,蒸馏水调零。 ② 在离心管中依次加入下列试剂: 试剂名称(μL测定管 对照管 空白管 (只做一次) 土样 0.1g 鲜土0.05g 干土 0.1g 鲜土0.05g 干土 甲苯 10 10 10 试剂一 290 490 290 试剂二 200 200 混匀, 37℃(水浴锅或恒温培养箱)振荡反应 1h 试剂三 300 300 300 混匀,12000rpm 室温离心 10min,上清液全部转移至 1mL 玻璃 比色皿(光径 1cm)中,于 405nm 下读取各管吸光值 AA=A 测定-A 对照-A 空白(每个测定管需设一个对照管)。 【注】:1.最后一步检测时,若有结晶析出,需要 37复溶再读取吸光值。 2.ΔA 在零附近徘徊,可延长 37的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加 土样质量 W(如增至 0.2g)。则改变后的 T W 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 3.若测定管 A 值大于 1.5 A 大于 1.5,可缩短 37的孵育时间 T(如减至 0.5 小时或更短)。 则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对最后一步的待检测上清液(包括测定管、对照管 和空白管)同时用蒸馏水进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。 4.若同时检测一大批同一背景下土壤样本(如都是黄土,黑土,红土,黄土等),可做三次样 本自身对照管(取平均值作为这批土壤样本的对照管),可从称样到检测步骤节省检测时间。 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.0174x + 0.024x PNP 摩尔质量(nmol),y A2、定义:每克土壤每小时水解 PNPP 产生 1nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。 S-NP(nmol/h/g 土样)=[(A-0.024)÷0.0174]÷W÷T×D=57.5×(A-0.024)÷W×D W---土壤样品质量,gD---稀释倍数,未稀释即为 1T---催化反应时间,1hPNP 相对分子质量---139.11附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10μmoL/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解, 若有结晶析出,需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8 μmoL/mL。也 可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 1mL 玻璃比色皿中直接加入:10μL 标准品+490μL 试剂一+300μL 试剂三,405nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。

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