更新时间:2024-06-05
蛋白含量(SP)试剂盒BCA 蛋白含量试剂盒提供一种简单,快速,耐去污剂(最多 5%)的检测蛋白质浓度 的方法。
蛋白含量(SP)试剂盒
蛋白含量(SP)试剂盒
本试剂盒仅供科研使用 1 BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书 (货号:WS8140F 分光法 96 样) 一、产品简介: BCA 蛋白含量试剂盒提供一种简单,快速,耐去污剂(最多 5%)的检测蛋白质浓度 的方法。由于蛋白质能将 Cu2+还原成 Cu+;BCA 可与 Cu+结合生成紫蓝色复合物,在 562nm 处有最大光吸光值,颜色的深浅与蛋白含量成正比,因此可根据吸光值测定蛋白质浓度。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂 A 液体 50mL×2 瓶 4℃保存 依据实验用量,临用前试剂 A:B=50:1 的比例混匀成反应 mix 试剂 B 液体 2mL×1 支 4℃保存 标准品 液体 1.5mL×1 支 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、恒温水浴锅、移液器。 四、蛋白含量测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液(提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐水) 冰浴匀浆,12000rpm,4℃离心 10min,取上清,即待测液。 【注】:依据研究经验,一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定,如 10 倍。实验前可以先选 2 个样本测定,摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 ② 细菌或细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液; 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次), 12000rpm,4℃离心 10min,取上清,即待测液。 【注】:依据研究经验,一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定,如 10 倍。实验前可以先选 2 个样本测定,摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 ③ 液体样本:澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min,调节波长到 562 nm,蒸馏水调零。 ② 反应 mix 置于 60℃水浴预热 30 min(仅煮一次即可)。 试剂名称(μL) 测定管 空白管(只做一次) 样本 20 蒸馏水 20 反应 mix 800 800 混匀,于 60℃保温 30min,全部转移到 1mL 玻璃比色皿 中,于 562nm 处测定吸光值 A,△A= A 测定-A 空白。 【注】:若△A﹥1.5,需将样本用提取液稀释后再测定。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.0687x - 0.0006;x 是标准品质量:μg,y 是△A。 2、Cpr (mg/g 鲜重)=[(△A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷(V1÷V×W) ×D =0.728×(△A+0.0006) ÷W×D 3、Cpr (mg/mL)=[(△A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷V1×D=0.728×(△A+0.0006)×D 4、Cpr (μg/104 cell))=[(△A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=1.46×(△A+0.0006)×D V---提取液体积:1mL; V1---加入粗提液体积:0.02mL; W---样本质量:g; D---稀释倍数,未稀释即为 1; 500---细菌或细胞总数,万。 附:标准曲线制作过程: 1 标准品母液(500μg/mL)。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 2.5,5, 25, 50, 250, 500. μg/mL。也可根据实 际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。