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土壤精an酸脱氨酶活性测定试剂盒

更新时间:2024-06-03

简要描述:

土壤精an酸脱氨酶活性测定试剂盒
氮素是限制植物生长发育的主要营养元素之一,土壤氮素是植物氮素营养的主要来源。 其中土壤精*酸脱氨酶也与土壤中氮转化有着密切关系。

土壤精an酸脱氨酶活性测定试剂盒

土壤精an酸脱氨酶活性测定试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤精*酸脱氨酶活性测定试剂盒说明书 (货号:WS0530F 分光法 24 样) 一、产品简介: 氮素是限制植物生长发育的主要营养元素之一,土壤氮素是植物氮素营养的主要来源。 其中土壤精*酸脱氨酶也与土壤中氮转化有着密切关系。 本试剂盒利用精*酸脱氨酶水解精*酸生成NH3-N,该产物在强碱性介质中与次氯酸盐 和*酚反应,生成水溶性染料靛酚蓝,通过检测生成的有色物质在630nm的最大光吸收峰, 进而得出土壤精*酸脱氨酶活力大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前加入 18mL 蒸馏水,充分溶 解备用,用不完的试剂仍 4保存; 试剂二 液体 30mL×1 4℃保存 试剂三 液体 13mL×1 4℃保存 避光保存。 试剂四 液体 7mL×1 4℃保存 试剂五 A:液体 7mL×2 B:液体μL×1 4℃保存 临用前取 60μL B 液进一瓶 A 中,混匀后作为试剂五使用。混匀 后的试剂五一周内用完。 标准品 液体 1 mL×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、离心机、水浴锅或恒温培养箱、可调 式移液器、蒸馏水。 四、土壤精*酸脱氨酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本的制备: 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网,备用。 2、上机检测: ① 培养:取 EP 管依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g) 0.5 0.5 试剂一 600 蒸馏水 600 混匀,放入 37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 3 小时 试剂二 600 600 震荡提取 30min8000rpm25℃离心 5min,取上清液。 ② 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 630nm③ 显色反应:在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管本试剂盒仅供科研使用 2 上清液 60 60 蒸馏水 180 180 试剂三 240 240 试剂四 120 120 试剂五 240 240 混匀,37℃放置 20min 后,于 630nm 读取吸光值 A,全部 液体转移至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中 ΔA=A 测定管-A 对照管(每个样本做一个自身对照)。 【注】1. 试剂三和四和五需分开加,不能事先混匀。 2. ΔA 值较小,可增加 37孵育时间 T(如由 3 小时增至 6 小时或更多)或在显色反应阶 段增加上清液量 V1(如增至 120μL,则蒸馏水体积相应减少);则改变后的 T V1 需代入 计算公式重新计算。 3. A 测定的值大于 1.5,可在显色反应阶段减少上清液的量 V1(如减至 20μL,则蒸馏水 体积相应增加);则改变后的上清液体积 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 1.9393x - 0.004x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA 2、土壤酶活定义:每天每克土样中产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。 土壤精*酸脱氨酶活力(μg/d/g 土样)=(ΔA+0.004)÷1.9393×(V÷V1)÷W÷T =82.5×(ΔA+0.004)÷W V---反应总体积,1200μLV1---显色反应中上清液体积,60μLT---反应时间,3h=1/8dW---土壤样本实际取样质量,g附:标准曲线制作过程: 1 把标准品母液(1mg/mL),用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0246810. μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。 2 在显色反应阶段,按照测定管加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。

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