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土壤芳基酰胺酶活性测定试剂盒

更新时间:2024-05-31

简要描述:

土壤芳基酰胺酶活性测定试剂盒
土壤芳基酰胺酶(Aryl-acylamidase,EC 3.5.1.13)可水解带有酰胺基团的化合物

土壤芳基酰胺酶活性测定试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤芳基酰胺酶活性测定试剂盒说明书 (货号:WS4430F 分光法 24 样) 一、产品简介: 土壤芳基酰胺酶(Aryl-acylamidaseEC 3.5.1.13)可水解带有酰胺基团的化合物;本 试剂盒利用土壤芳基酰胺酶水解底物 L-亮*酸β-萘胺生成β-萘胺,β-萘胺接着与对二甲 氨基肉桂醛生成红色偶氮化合物,该化合物于 540nm 处有特征吸收峰,通过检测该红色 物质的增加速率,即可计算土壤芳基酰胺酶活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 20mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使试剂落入底部,再 加入 6mL 蒸馏水,充分溶解备用, 试剂三 液体 14mL×1 4℃保存 试剂四 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使试剂落入底部,再 加入 15mL 乙醇,充分溶解备用。 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、天平、离心机、恒温水浴锅、乙醇可调式移液器。 四、土壤芳基酰胺酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样本情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样风干或者 30℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛,备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 0.1g 土壤 0.1g 土壤 试剂一 300 300 试剂二 100 混匀,于 37℃孵育 2h(间隔 30min 振荡混匀一次) 95%乙醇 600 600 试剂二 100 立即混匀,于 12000rpm,室温或 4℃离心 10min,离心 10min上清液待测。本试剂盒仅供科研使用 2 ③ 显色反应,在 EP 管中依次加入: 上清液 280 280 试剂三 280 280 试剂四 280 280 混匀,10min 后,全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,于 540nm 处测定吸光值 AA=A 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照)。 【注】:1.A 值在零附近徘徊,可在 37孵育阶段延长反应时间 T(如增至 3h 或更长),或增 加土壤样本量 W(如增至 0.2g),则改变后的反应时间 T W 需代入公式重新计算。 2. A 测定的值大于 1.8,可用乙醇对整个红色显色反应液进行稀释,则稀释倍数 D 需代入公式参与计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.0546x - 0.016x 是标准品浓度(μg/mL, y A2、酶活定义:37℃条件下,每克土样每小时释放出 1μg β-萘胺为一个酶活力单位。 土壤芳基酰胺酶活性(μg/h/g 土样)=(A+0.016)÷0.0546×V1÷W÷T =9.2×(A+0.016)÷W V1---孵育阶段的反应总体积,1mLT---反应时间,2hW---样本质量,g附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(2.5mg/mL):标准品用 1mL 乙醇溶解。(母液需在两天内用)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 5, 10, 15, 20, 25. μg/mL。也可根 据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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