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土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)试剂盒

更新时间:2024-05-31

简要描述:

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)试剂盒
土壤芳基硫酸酯酶(EC 3.1.6.1)来自于土壤微生物,能酶促土壤有机硫化物转化为植 物可吸收的无机态硫,在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用,是 反映土壤质量的一个重要生物学指标。

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)试剂盒

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤芳基硫酸酯酶(Solid-aryl sulfataseS-ASF)试剂盒说明书 (货号:WS6330F 分光法 24 样) 一、产品简介: 土壤芳基硫酸酯酶(EC 3.1.6.1)来自于土壤微生物,能酶促土壤有机硫化物转化为植 物可吸收的无机态硫,在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用,是反映土壤质量的一个重要生物学指标。 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基*酚(PNP),后者在 410nm 有特征光吸收。通过测定 410nm 光吸收增加速率,即可计算 S-ASF 酶活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂 mg×2 -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部, 每支加 1.5mL 试剂二溶解备用。 试剂二 液体 21mL×1 4℃保存 试剂三 23mL×1 4℃保存 标准品 粉剂×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、 甲苯(自备)和蒸馏水。 四、土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本的制备: 取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 410nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.1 0.1 甲苯 18 18 振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 10min 试剂一 90 试剂二 360 450 混匀, 37℃振荡反应 1h 试剂三 450 450 混匀,室温静置 2min12000rpm 室温离心 10min,取全部上清液于 1mL 玻璃比色皿中,于 410nm 下读取吸光值 AA= A 测定- A 对照(每 个样本需做一个自身对照)。 【注】:1.ΔA 过小,可以增加土样量(如至 0.2g)或延长保温时间(如:2h 或更长),重新调整 的样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。 2.A 测定超过 1.5,可取一半上清液加等体积蒸馏水(相当于稀释 2 倍)于 1mL 玻璃比本试剂盒仅供科研使用 2 色皿中检测,或者减少土样量,或者降低保温时间(如:10min),则稀释倍数 D 和重新 调整的样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.1285x - 0.002x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA2、单位定义:每小时每克土样中产生 1μg -硝基*酚(PNP)定义为一个酶活力单位。 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)活性(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.002)÷0.1285÷W÷T =7.8×(ΔA+0.002)÷W T---反应时间,1hW---实际称取干土质量; PNP 相对分子质量---139.11附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 EP 管加入:18μL 标准品+18μL 甲苯+432μL 试剂二+450μL 试剂三,混匀,取全 部上清液于 1mL 玻璃比色皿中,于 410nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。

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