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脯an氨酸脱氢酶(ProDH)试剂盒

更新时间:2024-05-28

简要描述:

脯an氨酸脱氢酶(ProDH)试剂盒
脯*酸脱氢酶(proline dehydragenase,PDH,EC 1.5.1.2) 催化脯*酸生成 Δ1-二氢吡咯- 5-羧酸的反应,是脯*酸降解过程的限速步骤。

脯an氨酸脱氢酶(ProDH)试剂盒

脯an氨酸脱氢酶(ProDH)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 脯*酸脱氢酶(PDH)试剂盒说明书 (货号:WS1011F 紫外法 48 样) 一、产品简介: 脯*酸脱氢酶(proline dehydragenasePDHEC 1.5.1.2) 催化脯*酸生成 Δ1-二氢吡咯- 5-羧酸的反应,是脯*酸降解过程的限速步骤。脯*酸是分布*广泛的一种渗透物质,在胁 迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯*酸,降低 PDH 活性 对于防止渗透胁迫对植物造成伤害、保护细胞结构等方面具有重要意义。 脯*酸脱氢酶(PDH)催化脯*酸脱氢并使 NAD+还原成 NADH,通过检测 NADH 340nm 处的增加速率即可得出 PDH 酶活性大小。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下,使粉体落到底部, 再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用 试剂二 液体 30mL×1 4℃保存 试剂三 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下,使粉体落到底部, 再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液器、研钵、 冰和蒸馏水。 四、脯*酸脱氢酶(PDH)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织样本,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆,12000rpm4℃离心 10min取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 2、上机检测① 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 在 1mL 石英比色皿(光径 1cm)中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 120 试剂一 20 试剂二 560 试剂三 20 轻轻混匀,室温(25℃)下,可先孵育 6min 后于 340nm 处读取 A130min 后读取 A2A=A2-A1【注】 1.A 的值在零附近,可以适当延长反应时间 T 60min 后或更长读取 A2,改变后的 反应时间需代入计算公式重新计算。或适当增加样本取样质量 W,则改变后的反应时 T 和样本质量 W 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 2. 若起始值 A1 太大如超过 2(如颜色较深的植物叶片,一般色素较高,则起始值相对 会偏高),可以适当减少样本加样量 V1(如减至 80μL,则试剂三相应增加),则改变 后的加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。 或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 12000rpm, 4℃离心 10min,上清液用于检测; 3.若上升趋势不稳定,可以每隔 2min 读取一次吸光值,选取一段线性下降的时间段 T 参与 计算,相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算 单位定义:每毫克组织蛋白在每分钟内生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr) ÷T=32.2×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算 单位定义:每克组织在每分钟内生成 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W× V1÷V) ÷T=32.2×ΔA÷W V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.12mLV2---反应体系总体积,7.2×10-4 Ld---光径,1cmε---NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmW---样本质量,gT---反应时间,30minCpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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