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木质素过氧化物酶(Lip)试剂盒

更新时间:2024-05-27

简要描述:

木质素过氧化物酶(Lip)试剂盒
木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

木质素过氧化物酶(Lip)试剂盒

木质素过氧化物酶(Lip)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 11 木质素过氧化物酶(Lignin peroxidaseLip)试剂盒说明书 (货号:WS5001F 紫外分光法 48 样) 一、产品简介: 木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解 酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制 等方面具有较大的应用潜力。 木质素过氧化物酶(LiP)氧化藜芦醇生成藜芦醛,藜芦醛在 310nm 处有特征吸收峰。 通过测定 310nm 处的藜芦醛的增加速率,即可得到木质素过氧化物酶(LiP)酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 120mL×1 4℃保存 试剂一 液体μL×1 4℃保存 临用前用前甩几下使液体落入底 部,再加 9mL 蒸馏水混匀备用。 试剂二 液体μL×1 4℃保存 临用前用前甩几下使液体落入底 部,取 2 个新的 EP 管,每管取 3.3ul 液体,再加 2mL 蒸馏水混匀备用。 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、天平、研钵、低温离心机、可调式 移液器。 四、木质素过氧化物酶(Lip)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注意】 若样本颜色较深(如植物叶片),可引起起始值 A1 值较大如超过 1.5,可在样本制备过程中 增加除色素步骤:取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 1g),加入 80%乙醇冰浴匀浆,12000rpm4离心 10min,弃掉色素较深的上清液;以上除色素步骤重复 2 次。最后向离心得到的沉淀中加入 1mL 提取液,混匀或再次冰浴匀浆,12000rpm4离心 10min,取上清置冰上待测。 ② 细菌或培养细胞: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液,超声波破碎细菌或细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);4×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照数量(104):提取液体积(mL)500-10001 的比例进行提取 ③ 液体样本:若是澄清液体,直接检测,若液体样本浑浊,需 4×12000rpm,离心 10min,取上清液检测。 2、上机检测: 1 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 310nm,蒸馏水调零。 2 所有试剂至常温状态(25℃)。 3 1mL 石英比色皿(光径 1cm)中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称(μL测定管 提取液 480 样本上清液 80 试剂一 160 试剂二 80 充分混匀,30℃条件下,10s 时于 310nm 处读 A15min 后再读取 A2,△A=A2- A1【注】:若ΔA 在零附近,可增加取样质量 W(如增至 0.2g 或更多),或增加样本加样体积 V1(如 增至 200μL 或更多,则加样体系中提取液相应减少),或延长反应时间 T(由 5min 增加至 10min 或更长),则改变后的 W V1 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1.按照蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位(U)。 LiP 活性(nmol/min/mg prot)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=215.1×A÷Cpr 2.按照样本质量计算: 酶活定义:每克样品每分钟氧化 1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位(U)。 LiP 活性(nmol/min/g 鲜重)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=215.1×A÷W 3.按照细胞数量计算: 酶活定义:每 104个细胞每分钟氧化 1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位(U)。 LiP 活性(nmol/min/104 cell)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(细胞数量×V1÷V)÷T =215.1×细胞数量 4.按照液体体积计算: 酶活定义:每毫升培养液每分钟氧化 1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位(U)。 LiP 活性(nmol/min/mL)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=215.1×A ε---藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cmd---比色皿光径,1cmV---加入提取液体积,1mLV1---反应中样本体积,0.08mLV2---反应总体积,0.8mL=8×10-4W---样本质量,gT---反应时间,5min Cpr---样本蛋白浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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