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锰过氧化物酶(Mnp)试剂盒

更新时间:2024-05-27

简要描述:

锰过氧化物酶(Mnp)试剂盒
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13,Mnp)是真菌分泌的一种糖基化的胞外蛋白,含亚铁血红素的过氧化物酶

锰过氧化物酶(Mnp)试剂盒

锰过氧化物酶(Mnp)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 锰过氧化物酶(Manganese peroxidaseMnp)试剂盒说明书 (货号:WS4001F 分光法 48 样) 一、产品简介: 锰过氧化物酶(EC1.11.1.13Mnp)是真菌分泌的一种糖基化的胞外蛋白,含亚铁血红 素的过氧化物酶,主要存在于引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌这两个担子真菌中,属于木 质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和环境中其他一些抗性物质,如腐殖质酸和包 括多环芳烃在内的多种有机污染物等。 锰过氧化物酶(Mnp)在 Mn2+存在的条件下,将二甲氧基*酚(DMP)氧化生成的产物 470nm 处有特征吸收峰。通过检测该产物在 470nm 处的增加速率,即可得到 Mnp 酶活 性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 30mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂×1 4℃保存 用前甩几下使粉剂落入底部,再加 5mL 无水乙醇溶解备用。 试剂三 粉剂×1 4℃保存 用前甩几下使粉剂落入底部,再加 3mL 蒸馏水充分溶解备用。 试剂四 液体×1 4℃保存 用前甩几下使液体落入底部,取出 3µL 液体至新的 EP 管中,再加 1.5mL 蒸馏水混匀备用。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、天平、低温离心机、研钵、冰和蒸馏水。 四、锰过氧化物酶( Mnp)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 细菌或培养细胞: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 4×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照数量(104):提取液体积(mL)500-10001 的比例进行提取 ③ 液体样本:若是澄清液体,直接检测,若液体样本浑浊,需 4×12000rpm,离心 10min,取上清液检测。 2、上机检测: 1 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 470nm,蒸馏水调零。 2 所有试剂至常温状态(25℃)。 3 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称(µL测定管 样本 80 试剂一 580 试剂二 80 试剂三 40 试剂四 20 混匀,30℃条件下反应,10s 时读取 A110min 后读取 A2,△A=A2-A1【注】若△A 在零附近徘徊,可增加样本量(如增至 40µL,则试剂一相应减少),或延长反应 时间 T 15min 或更长,则改变后的样本 V1 和反应时间 T 需代入公司重新计算。 五、结果计算: 1.按照蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol DMP 所需酶量为一个酶活力单位。 MnP 活性(nmol/min/mg prot)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=18.2×A÷Cpr 2.按照样本质量计算: 酶活定义:每克样品每分钟氧化 1nmol DMP 所需酶量为一个酶活力单位。 MnP 活性(nmol/min/g 鲜重)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=18.2×A÷W 3.按照细胞数量计算: 酶活定义:每 104个细胞每分钟氧化 1nmol DMP 所需酶量为一个酶活力单位。 MnP 活性(nmol/min/104 cell)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(细胞数量×V1÷V)÷T =18.2×ΔA÷细胞数量 4.按照液体体积计算: 酶活定义:每毫升液体每分钟氧化 1nmol DMP 所需酶量为一个酶活力单位。 MnP 活性(nmol/min/mL)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=18.2×ΔA ε---DMP 被氧化的产物的摩尔消光系数:55000L/mol/cmd---光径,1cmV---加入提取液体积,1mLV1---反应中样本体积,0.08mLV2---反应总体积,8×10-4 LW---样本质量,gT---反应时间,10minCpr---样本蛋白浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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