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肉桂酸4-羟基化酶(C4H)试剂盒

更新时间:2024-05-27

简要描述:

肉桂酸4-羟基化酶(C4H)试剂盒
肉桂酸-4-羟基化酶(C4H,EC 1.14.13.11)是苯丙烷类代谢途径的关键酶。可有效调节与之相应的黄酮类化合物等次生代谢产物的合成,其活性可作为植物抗性的一个生理指标。

肉桂酸4-羟基化酶(C4H)试剂盒

肉桂酸4-羟基化酶(C4H)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 肉桂酸 4-羟基化酶(C4H)试剂盒说明书 (货号:WS1001F 分光法 48 样) 一、产品简介: 肉桂酸-4-羟基化酶(C4HEC 1.14.13.11)是苯丙烷类代谢途径的关键酶。可有效调节 与之相应的黄酮类化合物等次生代谢产物的合成,其活性可作为植物抗性的一个生理指标。 本产品测试原理是以肉桂酸作为底物,在酶促反应的最适条件下,肉桂酸-4-羟基化酶催 化底物生成 4-羟基反式肉桂酸,其在最佳 PH 值下,产物 4-羟基反式肉桂酸在 340nm 下有 最大吸收峰,进而计算出该酶活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 试剂规格 保存方式 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 2.5mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂×2 -20℃保存 用前甩几下使粉剂落入底部, 每瓶再加 10mL 蒸馏水溶解,用 不完的试剂分装后-20℃保存, 禁止反复冻融,一周内用完。 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 试剂四 液体 2.5mL×1 4℃保存 试剂五 液体 3mL×1 4℃保存 三、所需用的仪器与用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液器、研钵、 冰和蒸馏水。 四、肉桂酸 4-羟基化酶(C4H)活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液组织,进行冰浴匀 浆。12000rpm, 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 2、上机检测: ① 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂(μL测定管 空白管(仅做一次) 样本 100 试剂一 50 50 试剂二 350 350 试剂三 300 400 混匀,30℃水浴反应 30min 试剂四 50 50 混匀,静置 2min 试剂五 60 60本试剂盒仅供科研使用 2 混匀后,取全部液体转移至 1mL 石英比色皿中,于 340nm 处读取吸光值 A,△A=A 测定-A 空白。 【注】若△A 的值在零附近徘徊,可增加样本加样量(如增加至 200μL,则试剂三相应减少) 或增加反应时间 T,则改变后的加样体积 V1 T 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1. 按样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织每分钟产生 1nmol 4-羟基反式肉桂酸为一个酶活力单位。 C4Hnmol/min/g 鲜重)=[(A÷ε÷d×V2×109) ]÷(W×V1÷V)÷T =12.4×ΔA÷W 3. 按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol 4-羟基反式肉桂酸为一个酶活力单位。 C4Hnmol/min/mg prot=[(A÷ε÷d×V2×109) ]÷(V1×Cpr) ÷T =12.4×ΔA÷Cpr ε ---4-羟基反式肉桂酸在此反应条件下于 340nm 处的摩尔吸光系数,2.45×104 L/mol /cmV---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.1 mLV2 ---反应体系总体积,910μL=9.1×10-4 Ld --光径,1 cmT---反应时间,30 minW---样本质量,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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