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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)试剂盒

更新时间:2024-05-20

简要描述:

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)试剂盒
我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。
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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)试剂盒

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 

β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-glucanaseβ-1,3-GA)试剂盒说明书 

(货号:WS6250F 分光法 48 样) 

一、产品简介: β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-GAEC 3.2.1.39)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解, 进而破坏真菌细胞壁,特别是与几丁质酶的协同作用下,可明显抑制真菌的生长。在植物 染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成β-1,3-GA,以增强植物体对不良外界刺 激产生抗性反应,因此β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。 β-1,3-GA 水解昆布多糖的β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端。利用 3,5 二硝基水杨酸测 定还原糖的量,在 540nm 读取吸光值,进而得出β-1,3 葡聚糖酶的活性。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 6mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 用前加入 3mL 试剂一,充分溶解待 用;用不完的试剂 4℃保存; 试剂三 液体 30mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调试移液器、台式离心机、水浴 锅、移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.2g 组织(水分充足的样本可取 1g),加入 1mL 经预冷的 95%乙醇冰浴匀浆, 4℃放置 10min12000rpm4℃离心 5min;弃上清,留沉淀,向沉淀中加入经预冷的 80%乙醇混匀,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 5min;弃上清,留沉淀。再向沉 淀中加入 1mL 经预冷提取液,涡旋混匀,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 10min留上清,弃沉淀。上清液置冰上待测。 ② 细菌/真菌样本: 先收集细菌/真菌到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌/真菌加入 1mL 提取液; 冰浴超声波破碎细菌/真菌(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 []:也可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例进行提取) ③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入下列试剂: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 20 煮沸样本* 20本试剂盒仅供科研使用 2 试剂二 20 20 充分混匀,放入 37℃水浴 30 min 试剂三 300 300 混匀,95℃水浴 5min(可用封口膜缠紧,防止水分散失),流水冷却至室温 蒸馏水 560 560 混匀,全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中,540nm 处记录各管吸光值 AΔA=A 测定-A 对照(每个测定管对应一个对照管)。 【注】:1.煮沸样本*:将同一个样本在沸水(98-100℃)中煮沸 15 分钟,以将酶彻di灭活。 12000rpm4离心 10min;上清液备用。 2.ΔA 很小在零附近徘徊,可在样本制备时加大取样质量 W(由 0.2g 增加到 0.5g 等),或增加样本加样量 V1(由 20μL 增加到 100μL,相应的蒸馏水减少,保持 总体积 900μL 不变),或延长 37℃水浴时间 T(由 30min 增至 60min),则改变 后的 W V1 T 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 6.6714x - 0.0341x 为标准品质量(mg),y ΔA2、按蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟分解昆布多糖产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.0341)÷6.6714×103]÷(V1×Cpr) ÷T=250×(ΔA+0.0341)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织每分钟分解昆布多糖产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0341)÷6.6714×103]÷(W×V1÷V) ÷T=250×(ΔA+0.0341)÷W 4、按细菌/真菌密度计算: 酶活定义:每1万个细菌或真菌每分钟分解昆布多糖产生1μg葡萄糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(μg/min /104 cell)=[(ΔA+0.0341)÷6.6714×103]÷(500×V1÷V) ÷T=0.5×(ΔA+0.0341) 5、按液体体积计算: 酶活定义:每毫升样本每分钟分解昆布多糖产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(μg/min/mL)=[(ΔA+0.0341)÷6.6714×103]÷V1÷T=250×(ΔA+0.0341) V---加入提取液体积,1mLV1---加入样本体积,20μL =0.02mLT---30minW---样本鲜重,g500---细菌/真菌总数,500 万; 葡萄糖分子量---180.16Cpr---样本蛋白质浓,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水(母液需在两天 内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10. mg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表(标准品替换样本,且试剂二换成蒸馏水)操作,根据结果即本试剂盒仅供科研使用 可制作标准曲线。 3

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