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NADP+-山li醇脱氢酶(NADP+-SDH)试剂盒

更新时间:2024-05-20

简要描述:

NADP+-山li醇脱氢酶(NADP+-SDH)试剂盒
我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。
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NADP+-山li醇脱氢酶(NADP+-SDH)试剂盒

NADP+-山li醇脱氢酶(NADP+-SDH)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 

 NADP+ -山li醇脱氢酶活性测定试剂盒说明书 

(货号:WS3750F 紫外分光法 48 样) 一、产品简介: 山li醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenaseSDH催化山li醇脱氢生成果糖,是调控 生物体内山li醇含量的关健酶之一,依据依赖的辅酶分为 NADP+依懒性山li醇脱氢 酶(NADP+ -SDHEC 1.1.1.B60)和 NAD+依懒性山li醇脱氢酶(NAD+ -SDH), NADP+ -SDH 催化山li醇转化成葡萄糖,NAD+ -SDH 催化山li醇转化成果糖。 NADP + -SDH 催化山li醇脱氢生成葡萄糖,同时还原 NADP +生成 NADPH,测定 340nm 吸光度增加速率可以计算 NADP + -SDH 酶活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部, 再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 液体 35mL×1 4℃保存 试剂三 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部, 再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、台式离心机、水浴锅、可调式移 液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、NADP+-山li醇脱氢酶(NADP+-SDH)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min,取上 清,置冰上待测。 【注意】 若样本颜色较深(如植物叶片),可引起起始值 A1 值较大如超过 1.6,可在样本制备过程中 增加除色素步骤:取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 80%乙醇冰浴匀浆,12000rpm4离心 10min,弃掉色素较深的上清液;以上除色素步骤重复 2 次。最后向离心得到的沉淀中加入 1mL 提取液,混匀或再次冰浴匀浆,12000rpm4离心 10min,取上清置冰上待测。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液;超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);4ºC 12,000rpm 离心 10min,取上清作为待测样品。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:澄清的液体样本直接检测;若浑浊离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 紫外分光光光度计预热 30min 以上,设置温度 25℃,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂放在 25℃水浴 5min③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入: 试剂名称(μL测定管本试剂盒仅供科研使用 2 样本 60 试剂一 20 试剂二 660 混匀,25℃下孵育 10min 试剂三 20 混匀,25℃下,20s 时于 340nm 处读取 A120min 后读取 A2ΔA=A2-A1【注】:若ΔA 过小,可以延长反应时间(如:30min 或更长)再读取 A2,或加大样本体积 V1(如增至 100μL,则试剂二相应减少),重新调整的反应时间 T 和加样体积 V1 代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1. 按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 NADP + -SDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=101.8×ΔA÷Cpr 2. 按样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 NADP + -SDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=101.8×ΔA÷W 3. 按细菌或细胞密度计算: 酶活定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 NADP + -SDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.2×ΔA 4. 按照液体体积计算 酶活定义:每毫升液体每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 NADP + -SDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷V1÷T=101.8×ΔA ε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cmd---光径,1cmV---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.06mLV2---反应体系总体积,7.6×10-4 LT---反应时间,20 min500---细菌或细胞总数,500 万; W---样本质量; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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